កញ្ចប់ ForeDirect RT-qPCR
ការពិពណ៌នាកញ្ចប់៖
◮សម្រាប់ RNA ការពង្រីកពេលវេលាជាក់ស្តែងដោយផ្ទាល់ពីការប្រមូល swab ដោយគ្មានដំណើរការបន្សុត RNA ។ឧបករណ៍នេះបញ្ចប់វដ្ត qRT-PCR ក្នុងរយៈពេលមួយម៉ោង។ល្បាយអង់ស៊ីមគឺជាការបញ្ចូលគ្នាដ៏ប្រសើរនៃ Reverse Transcriptase, Hot-Start Taq DNA polymerase, RNase inhibitor ។សតិបណ្ដោះអាសន្នប្រតិកម្មមានសមាសធាតុដែលត្រូវការទាំងអស់ រួមទាំងសមាសធាតុសតិបណ្ដោះអាសន្នដែលត្រូវបានកែលម្អ Mg2+, dUTP និង dNTPs ។
ការពិពណ៌នា
កញ្ចប់ ForeDirect RT-qPCR ត្រូវបានរចនាឡើងសម្រាប់ការពង្រីក RNA ក្នុងពេលជាក់ស្តែងដោយផ្ទាល់ពីការប្រមូល swab ដោយគ្មានដំណើរការបន្សុត RNA ។ឧបករណ៍នេះបញ្ចប់វដ្ត qRT-PCR ក្នុងរយៈពេលមួយម៉ោង។ល្បាយអង់ស៊ីមគឺជាការបញ្ចូលគ្នាដ៏ប្រសើរនៃ Reverse Transcriptase, Hot-Start Taq DNA polymerase, RNase inhibitor ។សតិបណ្ដោះអាសន្នប្រតិកម្មមានសមាសធាតុដែលត្រូវការទាំងអស់ រួមទាំងសមាសធាតុសតិបណ្ដោះអាសន្នដែលត្រូវបានកែលម្អ Mg2+, dUTP និង dNTPs ។
លក្ខណៈបច្ចេកទេស
100T
សមាសធាតុនៃកញ្ចប់
| ភ្នាក់ងារបញ្ចេញអាស៊ីត nucleic |
| ភ្នាក់ងារការពារ RNA |
| 2 × RT-qPCR Buffer |
| ល្បាយអង់ស៊ីម (Taq&M-MLV) |
| សេចក្តីណែនាំ |
កម្មវិធី PCR
1. នៅពេលដែលបំពង់ប្រតិកម្ម PCR ត្រូវបាន centrifuged យ៉ាងខ្លី ដាក់វានៅក្នុងធុងគំរូនៃឧបករណ៍ពង្រីក។
2. ពិធីការកំដៅ
| ជំហាន | សីតុណ្ហភាព | ពេលវេលា | វដ្ត | |
| 1 | ប្រតិចារិកបញ្ច្រាស | 50 ℃ | 15 នាទី | 1 |
| 2 | មុន denaturation | ៩៥ អង្សាសេ | 1 នាទី | 1 |
| 3 | ការប្រែពណ៌ | ៩៥ អង្សាសេ | 10 វិនាទី | 42 |
| 4 | Anneal/Extension | 60 ℃ | 30 វិនាទី | |
ចំណាំ៖សញ្ញា fluorescent ត្រូវបានរកឃើញភ្លាមៗបន្ទាប់ពីជំហានបន្ថែមនៃវដ្តនីមួយៗ។
3. បន្ទាប់ពីការកំណត់ រក្សាទុកឯកសារ ហើយដំណើរការកម្មវិធីប្រតិកម្ម។
ជំហានប្រតិបត្តិការ
មុនពេលរៀបចំ reagent, reagents ទាំងអស់នៅក្នុងឧបករណ៍គួរតែត្រូវបាន thawed នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ និងលាយបញ្ចូលគ្នាថ្នមៗ។
ការរៀបចំសារធាតុ
1. រៀបចំល្បាយបញ្ចេញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក
| សមាសភាគ | កម្រិតសំឡេងក្នុងមួយគំរូ ឬការគ្រប់គ្រង |
| ភ្នាក់ងារបញ្ចេញអាស៊ីត nucleic | 5 μL |
| ភ្នាក់ងារការពារ RNA | 0.5 μL |
2. រៀបចំល្បាយប្រតិកម្ម
| សមាសភាគ | កម្រិតសំឡេងក្នុងមួយគំរូ ឬការគ្រប់គ្រង |
| 2 × RT-qPCR Buffer | 15 μL |
| ល្បាយអង់ស៊ីម (Taq&M-MLV) | 1.5 μL |
| Primers និង Probes | 1μL |
ការផ្ទុកនិងអាយុកាលធ្នើ
- កញ្ចប់ត្រូវរក្សាទុកនៅ -20± 5℃.រយៈពេលសុពលភាពគឺ 12 ខែ។
- ជៀសវាងការកកម្តងហើយម្តងទៀត (<5 វដ្ត)។
