Cell Total RNA Isolation Kit កញ្ចប់សម្អាត RNA ដាច់ដោយឡែកពីកោសិកា
ការពិពណ៌នាកញ្ចប់៖
RNA សរុបដែលបន្សុត និងគុណភាពខ្ពស់អាចទទួលបានពីកោសិកាវប្បធម៌ផ្សេងៗក្នុងរយៈពេល 11 នាទី។
RNase-Free
ដំណើរការនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (15-25 ℃)
ជាមួយ DNA-Cleaning Column
ទិន្នផល RNA ខ្ពស់។
លឿន៖ បញ្ចប់ការស្រង់ចេញក្នុងរយៈពេល 11 នាទី។
សុវត្ថិភាព៖ គ្មានសារធាតុគីមីសរីរាង្គ
ការពិពណ៌នា
កញ្ចប់នេះប្រើជួរឈរបង្វិល និងរូបមន្តដែលបង្កើតឡើងដោយ Foregene ដែលអាចទាញយក RNA សរុបដែលមានភាពបរិសុទ្ធ និងគុណភាពខ្ពស់ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាពពីកោសិកាដែលដាំដុះនៅក្នុងចាន 96, 24, 12 និង 6-well ។
កញ្ចប់នេះផ្តល់នូវជួរឈរសម្អាត DNA ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព ដែលអាចបំបែកសារធាតុ supernatant និង cell lysate បានយ៉ាងងាយស្រួល ចង និងដក DNA ហ្សែនចេញ។ប្រតិបត្តិការគឺសាមញ្ញ និងសន្សំសំចៃពេលវេលា.
Tជួរឈរតែមួយគត់ RNA របស់គាត់អាចចង RNA ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាពជាមួយនឹងរូបមន្តតែមួយគត់។គំរូមួយចំនួនធំអាចដំណើរការក្នុងពេលដំណាលគ្នា។
សមាសធាតុនៃកញ្ចប់
| សមាសភាពកញ្ចប់ | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 ធ | ២០០ ធ | |
| សតិបណ្ដោះអាសន្ន cRL1* | 25 មីលីលីត្រ | 100 មីលីលីត្រ |
| សតិបណ្ដោះអាសន្ន cRL2 | 15 មីលីលីត្រ | 60 មីលីលីត្រ |
| Buffer RW1* | 25 មីលីលីត្រ | 100 មីលីលីត្រ |
| Buffer RW2 | 24 មីលីលីត្រ | 96 មីលីលីត្រ |
| RNase-Free ddH2O | 10 មីលីលីត្រ | 40 មីលីលីត្រ |
| RNA-Only Column | 50 | ២០០ |
| ជួរឈរសម្អាត DNA | 50 | ២០០ |
| ការណែនាំ | 1 | 1 |
* សូមពាក់ស្រោមដៃ និងចាត់វិធានការការពារកំឡុងពេលប្រតិបត្តិការ ព្រោះ Buffer cRL1 និង Buffer RW1 មានអំបិល chaotropic ដែលធ្វើឱ្យរលាក។
លក្ខណៈពិសេស & គុណសម្បត្តិ
■ ដំណើរការទាំងមូលត្រូវបានដំណើរការនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (15-25 ℃) ដោយមិនបាច់ងូតទឹកទឹកកក និង centrifugation សីតុណ្ហភាពទាប។
■ កញ្ចប់ទាំងមូលគឺ RNase-Free មិនចាំបាច់ព្រួយបារម្ភអំពីការរិចរិល RNA ទេ។
■ DNA-Cleaning Column ភ្ជាប់ DNA យ៉ាងជាក់លាក់ ដូច្នេះកញ្ចប់អាចលុបការចម្លងរោគ DNA ហ្សែនដោយមិនចាំបាច់បន្ថែម DNase បន្ថែម។
■ ទិន្នផល RNA ខ្ពស់៖ ជួរឈរតែ RNA និងរូបមន្តតែមួយគត់អាចបន្សុទ្ធ RNA ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព។
■ ល្បឿនលឿន៖ ងាយស្រួលក្នុងការដំណើរការ និងអាចបញ្ចប់ក្នុងរយៈពេល 11 នាទី។
■ សុវត្ថិភាព៖ មិនទាមទារសារធាតុសរីរាង្គទេ។
■ គុណភាពខ្ពស់៖ RNA បន្សុតគឺមានភាពបរិសុទ្ធខ្ពស់ គ្មានប្រូតេអ៊ីន និងសារធាតុមិនបរិសុទ្ធផ្សេងទៀត ហើយអាចបំពេញតាមការពិសោធន៍ជាបន្តបន្ទាប់ផ្សេងៗ។
កម្មវិធីកញ្ចប់
វាស័ក្តិសមសម្រាប់ការទាញយក និងការបន្សុតនៃ RNA សរុបពីកោសិកាវប្បធម៌នៅក្នុងចាន 96, 24, 12 និង 6-អណ្តូង។
លំហូរការងារ
ដ្យាក្រាម
ដ្យាក្រាមថ្ម agarose gel នៃ Cell Total RNA Isolation Kit បានព្យាបាលចំនួនកោសិកាផ្សេងៗគ្នាខាងលើ 20μl volume elution យក 2μl purified RNA សរុប 1% ។
ការផ្ទុកនិងអាយុកាលធ្នើ
ឧបករណ៍នេះអាចត្រូវបានរក្សាទុករយៈពេល 12 ខែនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (15-25 ℃) ឬ 2-8 ℃សម្រាប់រយៈពេលយូរ (24 ខែ) ។
សតិបណ្ដោះអាសន្ន cRL1 អាចត្រូវបានរក្សាទុកនៅ 4 ℃ សម្រាប់រយៈពេល 1 ខែបន្ទាប់ពីបន្ថែម 2-hydroxy-1-ethanethiol (ជាជម្រើស) ។
RNA មិនត្រូវបានស្រង់ចេញ ឬទិន្នផល RNA មានកម្រិតទាប
ជារឿយៗមានកត្តាជាច្រើនដែលជះឥទ្ធិពលដល់ប្រសិទ្ធភាពនៃការស្តារឡើងវិញ ដូចជា៖ ខ្លឹមសារនៃ RNA គំរូជាលិកា វិធីសាស្រ្តនៃប្រតិបត្តិការ បរិមាណ elution ជាដើម។
1. ការងូតទឹកទឹកកកឬការចាប់ផ្ចិត cryogenic (4°C) ត្រូវបានធ្វើឡើងកំឡុងពេលប្រតិបត្តិការ។
អនុសាសន៍: ដំណើរការនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (15-25 ° C) ពេញមួយដំណើរការទាំងមូល កុំងូតទឹកទឹកកក និង centrifuge នៅសីតុណ្ហភាពទាប។
2. ការរក្សាទុកគំរូមិនត្រឹមត្រូវ ឬពេលវេលាផ្ទុកសំណាកច្រើនពេក។
អនុសាសន៍៖ ទុកសំណាកនៅសីតុណ្ហភាព -80 °C ឬបង្កកក្នុងអាសូតរាវ និងជៀសវាងការប្រើទឹកកកម្តងហើយម្តងទៀត។ព្យាយាមប្រើជាលិកាស្រស់ ឬកោសិកាវប្បធម៌សម្រាប់ការទាញយក RNA ។
3. លីលីសគំរូមិនគ្រប់គ្រាន់។
អនុសាសន៍៖ នៅពេលធ្វើជាលិកាដូចគ្នា ត្រូវប្រាកដថាជាលិកាមានភាពដូចគ្នាគ្រប់គ្រាន់ ហើយកោសិកាជាលិកាត្រូវបានបំបែកគ្រប់គ្រាន់ ដើម្បីពន្យល់ពីការបញ្ចេញ RNA ។
4. ភាពវៃឆ្លាតមិនត្រូវបានបន្ថែមត្រឹមត្រូវទេ។
អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់ថា RNase-Free ddH2O ត្រូវបានបន្ថែមទម្លាក់តាមទិសទៅកណ្តាលនៃភ្នាសជួរឈរបន្សុត។
5. បរិមាណត្រឹមត្រូវនៃអេតាណុលដាច់ខាតមិនត្រូវបានបន្ថែមទៅ Buffer RL2 ឬ Buffer RW2 ទេ។
អនុសាសន៍៖ អនុវត្តតាមការណែនាំ បន្ថែមបរិមាណត្រឹមត្រូវនៃអេតាណុលដាច់ខាតទៅ Buffer RL2 និង Buffer RW2 ហើយលាយឱ្យបានល្អមុនពេលប្រើឧបករណ៍។
6. កំរិតប្រើសំណាកជាលិកាគឺមិនសមស្របទេ។
ការណែនាំ៖ ប្រើជាលិកា ១០-២០ មីលីក្រាម ឬ (១-៥) × ១០6កោសិកាក្នុងមួយសតិបណ្ដោះអាសន្ន 500 μl RL1 ដោយសារការប្រើប្រាស់ជាលិកាច្រើនពេកអាចបណ្តាលឱ្យកាត់បន្ថយការទាញយក RNA ។
7. បរិមាណ elution មិនត្រឹមត្រូវ ឬ elution មិនពេញលេញ។
អនុសាសន៍: បរិមាណ elution នៃជួរឈរបន្សុតគឺ 50-200 μl;ប្រសិនបើឥទ្ធិពល elution មិនពេញចិត្ត វាត្រូវបានណែនាំអោយពន្យារម៉ោងដាក់សីតុណ្ហភាពក្នុងបន្ទប់ បន្ទាប់ពីបន្ថែម RNase-Free ddH ដែលត្រូវបានកំដៅជាមុន2O, ឧទាហរណ៍សម្រាប់ 5-10 នាទី។
8. ជួរឈរបន្សុតមានសំណល់អេតាណុលបន្ទាប់ពីការលាងសម្អាត Buffer RW2 ។
ការណែនាំ៖ ប្រសិនបើមានសំណល់អេតាណុលបន្ទាប់ពីការលាងសម្អាត Buffer RW2 ការផ្ចិតបំពង់ទទេរយៈពេល 1 នាទី ពេលវេលាសម្រាប់ប្រតិបត្តិការ centrifugation បំពង់ទទេអាចកើនឡើងដល់ 2 នាទី ឬជួរឈរបន្សុតអាចដាក់នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់រយៈពេល 5 នាទី ដើម្បីដកអេតាណុលដែលនៅសល់ចេញបានគ្រប់គ្រាន់។
RNA បន្សុតត្រូវបានបំផ្លាញ
គុណភាពនៃ RNA បន្សុតគឺទាក់ទងទៅនឹងកត្តាដូចជាការរក្សាសំណាក ការចម្លងរោគ RNase និងឧបាយកលជាដើម។
1. សំណាកជាលិកាមិនត្រូវបានរក្សាទុកទាន់ពេលទេ។
អនុសាសន៍៖ ប្រសិនបើសំណាកជាលិកា ឬកោសិកាមិនត្រូវបានប្រើក្នុងលក្ខណៈទាន់ពេលវេលាបន្ទាប់ពីការប្រមូល រក្សាទុកភ្លាមៗនៅសីតុណ្ហភាព -80 °C ឬអាសូតរាវ។ដើម្បីទាញយក RNA សូមប្រើជាលិកា ឬគំរូកោសិកាដែលទើបនឹងយកនៅពេលណាដែលអាចធ្វើទៅបាន។
2. ការកកម្តងហើយម្តងទៀតនៃសំណាកជាលិកា។
អនុសាសន៍៖ នៅពេលរក្សាទុកសំណាកជាលិកា យកល្អគួរតែកាត់វាជាបំណែកតូចៗសម្រាប់ការរក្សាទុក ហើយយកបំណែកមួយចេញនៅពេលប្រើប្រាស់ ដើម្បីជៀសវាងការកកសំណាកម្តងទៀត និងការរិចរិលនៃ RNA ។
3. RNase ត្រូវបានណែនាំ ឬមិនពាក់ស្រោមដៃ របាំងមុខ។ល។ ក្នុងអំឡុងពេលប្រតិបត្តិការ។
អនុសាសន៍៖ ការពិសោធន៍ទាញយក RNA ត្រូវបានអនុវត្តយ៉ាងល្អបំផុតនៅក្នុងបន្ទប់រៀបចំ RNA ដាច់ដោយឡែក ហើយតារាងត្រូវបានសម្អាតមុនពេលពិសោធន៍។
ពាក់ស្រោមដៃ និងរបាំងដែលអាចចោលបានក្នុងអំឡុងពេលពិសោធន៍ ដើម្បីកាត់បន្ថយការរិចរិល RNA ដែលបណ្តាលមកពីការណែនាំនៃ RNase ។
4. សារធាតុ Reagents ត្រូវបានបំពុលដោយ RNase កំឡុងពេលប្រើប្រាស់។
ការណែនាំ៖ ជំនួសដោយឧបករណ៍ញែក RNA សរុបសត្វថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ពាក់ព័ន្ធ។
5. បំពង់ centrifuge, គន្លឹះ, ល. ដែលប្រើក្នុងការរៀបចំ RNA ត្រូវបានបំពុលដោយ RNase ។
អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់ថា បំពង់ centrifuge, គន្លឹះ, pipettes ជាដើម ដែលប្រើក្នុងការទាញយក RNA គឺសុទ្ធតែជា RNase-Free។
RNA ដែលទទួលបានបន្សុតប៉ះពាល់ដល់ការពិសោធន៍ខាងក្រោម
RNA បន្សុតដោយជួរឈរបន្សុត ប្រសិនបើអ៊ីយ៉ុងអំបិល មាតិកាប្រូតេអ៊ីនធំពេកនឹងប៉ះពាល់ដល់ការពិសោធន៍ខាងក្រោមដូចជា៖ ការចម្លងបញ្ច្រាស Northern Blot et al ។
1. RNA ដែលត្រូវបានដកចេញមានសំណល់អ៊ីយ៉ុងអំបិល។
អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់ថាបរិមាណអេតាណុលត្រឹមត្រូវត្រូវបានបន្ថែមទៅ Buffer RW2 និងធ្វើការលាងសម្អាតជួរឈរបន្សុតចំនួន 2 នៅល្បឿន centrifugal ដែលបានបញ្ជាក់សម្រាប់ប្រតិបត្តិការ។ប្រសិនបើមានសំណល់អ៊ីយ៉ុងអំបិល សូមទុកជួរឈរបន្សុតទៅ Buffer RW2 រយៈពេល 5 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ ហើយធ្វើ centrifugation ដើម្បីបង្កើនការយកចេញនូវភាពកខ្វក់នៃអំបិល។
2. សំណល់អេតាណុលនៅក្នុង elutioned RNA ។
អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់ថាបន្ទាប់ពីការលាងសតិបណ្ដោះអាសន្ន RW2 ធ្វើប្រតិបត្តិការផ្ចិតផ្ចិតបំពង់ទទេក្នុងល្បឿនផ្ចិតដែលបានបង្ហាញសម្រាប់ប្រតិបត្តិការ បង្កើនពេលវេលានៃប្រតិបត្តិការផ្ចិតបំពង់ទទេដល់ 2 នាទី ប្រសិនបើនៅមានសំណល់អេតាណុល ឬទុកវានៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់រយៈពេល 5 ម៉ែត្រ។
