Foreasy Taq DNA Polymerase
ការពិពណ៌នាកញ្ចប់៖
◮ភាពជាក់លាក់ខ្ពស់៖ អង់ស៊ីមមានសកម្មភាពចាប់ផ្តើមក្តៅជាក់លាក់។
◮ការពង្រីកលឿន៖ ១០ វិនាទី/គីឡូបៃ។
◮គំរូដែលអាចសម្របខ្លួនបានខ្ពស់៖ អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីពង្រីក GC ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព តម្លៃខ្ពស់ គំរូ DNA ដែលពិបាកពង្រីកផ្សេងៗ។
◮ភាពស្មោះត្រង់ខ្លាំង៖ អង់ស៊ីម Taq ធម្មតា ៦ ដង។
◮ស្ថេរភាពកម្ដៅខ្លាំង៖ វាអាចត្រូវបានដាក់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C សម្រាប់មួយសប្តាហ៍ និងរក្សាបានច្រើនជាង 90% សកម្មភាព។
ការពិពណ៌នា
Foreasy Taq DNA Polymerase គឺជាអង់ស៊ីម Taq ថ្មីដែលបង្ហាញនៅក្នុងបាក់តេរីវិស្វកម្ម Escherichia coli ដោយបច្ចេកវិទ្យាផ្សំហ្សែន។អង់ស៊ីមខ្លួនវាមានសកម្មភាពចាប់ផ្តើមក្តៅជាក់លាក់ ហើយអាចប្រើសម្រាប់ PCR ធម្មតា និង qPCR ។វាមានសកម្មភាព 5'→3' DNA polymerase និង 5'→3' សកម្មភាព exonuclease ប៉ុន្តែមិនមានសកម្មភាព 3'→5' exonuclease ទេ។
សមាសធាតុនៃកញ្ចប់
| សមាសភាគ | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
| Foreasy Taq DNA Polymerase(5 U/μL) | 5000 U (1 មីលីលីត្រ) | 50 KU (10 មីលីលីត្រ) | 500 KU (100 មីលីលីត្រ) |
| 2 × Taq សតិបណ្ដោះអាសន្នប្រតិកម្ម | ២៥មល × ៥ | 250ml × 5 | 500ml ×25 |
លក្ខណៈពិសេស & គុណសម្បត្តិ
- ភាពជាក់លាក់ខ្ពស់៖ អង់ស៊ីមមានសកម្មភាពចាប់ផ្តើមក្តៅជាក់លាក់។
- ពង្រីកលឿន៖ 10 វិនាទី/គីឡូបៃ។
- គំរូដែលអាចសម្របខ្លួនបានខ្ពស់៖ អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីពង្រីក GC ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព តម្លៃខ្ពស់ គំរូ DNA ពិបាកពង្រីកផ្សេងៗ។
- ភាពស្មោះត្រង់ខ្លាំង៖ អង់ស៊ីម Taq ធម្មតា ៦ ដង។
- ស្ថេរភាពកម្ដៅខ្លាំង៖ វាអាចត្រូវបានដាក់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C សម្រាប់មួយសប្តាហ៍ និងរក្សាបានច្រើនជាង 90% សកម្មភាព។
កម្មវិធីកញ្ចប់
ប្រព័ន្ធ PCR/qPCR ផ្សេងៗ និងប្រព័ន្ធ PCR ផ្ទាល់
ការពង្រីក PCR នៃបំណែក DNA
ការដាក់ស្លាក DNA
លំដាប់ DNA
PCR A-កន្ទុយ
U និយមន័យ
1U: បរិមាណអង់ស៊ីមដែលត្រូវការដើម្បីបញ្ចូល 10 nmol នៃ deoxynucleotides ទៅក្នុងបញ្ហាមិនរលាយអាស៊ីត ដោយប្រើ DNA មេជីវិតឈ្មោលរបស់ត្រី salmon ដែលបានធ្វើឱ្យសកម្មជាគំរូ/ primer សម្រាប់រយៈពេល 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 74 ° C ។
លក្ខខណ្ឌប្រតិកម្ម
| សីតុណ្ហភាព | ពេលវេលា | វដ្ត |
| ៣៧ អង្សាសេ | 5 នាទី | 1 |
| ៩៤ អង្សាសេ | 5 នាទី | 1 |
| ៩៤ អង្សាសេ | 10 វិ | 35 |
| 60°C | 10 វិ | |
| ៧២ អង្សាសេ | 20 វិនាទី/គីឡូបៃ | |
| ៧២ អង្សាសេ | 2 នាទី | 1 |
ការផ្ទុក
-20 ± 5 °C សម្រាប់រយៈពេល 2 ឆ្នាំឬនៅ -80 ° C សម្រាប់ការផ្ទុករយៈពេលវែង។
មិនមានសញ្ញាពង្រីក
1.Taq DNA Polymerase នៅក្នុងឧបករណ៍បាត់បង់សកម្មភាពរបស់វា ដោយសារការផ្ទុកមិនត្រឹមត្រូវ ឬផុតកំណត់នៃកញ្ចប់។
អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់លក្ខខណ្ឌផ្ទុករបស់ឧបករណ៍;បន្ថែមបរិមាណសមស្របនៃ Taq DNA Polymerase ទៅប្រព័ន្ធ PCR ឬទិញឧបករណ៍ PCR ពេលវេលាពិតថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ពាក់ព័ន្ធ។
2. មានសារធាតុរារាំងជាច្រើននៃ Taq DNA Polymerase នៅក្នុងគំរូ DNA ។
ការណែនាំ៖ សម្អាតគំរូឡើងវិញ ឬកាត់បន្ថយចំនួនពុម្ពដែលបានប្រើ។
3. កំហាប់ Mg2+ មិនសមរម្យទេ។
អនុសាសន៍៖ កំហាប់ Mg2+ នៃ 2× Real PCR Mix ដែលយើងផ្តល់គឺ 3.5mM ។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ សម្រាប់ primers និងគំរូពិសេសមួយចំនួន កំហាប់ Mg2+ អាចខ្ពស់ជាង។ដូច្នេះ អ្នកអាចបន្ថែម MgCl2 ដោយផ្ទាល់ ដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពកំហាប់ Mg2+ ។វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យបង្កើន Mg2+ 0.5mM រាល់ពេលសម្រាប់ការបង្កើនប្រសិទ្ធភាព។
4. លក្ខខណ្ឌនៃការពង្រីក PCR គឺមិនសមស្របទេ ហើយលំដាប់បឋម ឬការប្រមូលផ្តុំគឺមិនត្រឹមត្រូវ។
ការណែនាំ៖ បញ្ជាក់ពីភាពត្រឹមត្រូវនៃលំដាប់ primer ហើយ primer មិនត្រូវបានបន្ទាបបន្ថោកទេ។ប្រសិនបើសញ្ញា amplification មិនល្អ សូមព្យាយាមបន្ថយសីតុណ្ហភាព annealing និងលៃតម្រូវកំហាប់ primer ឱ្យបានត្រឹមត្រូវ។
5. ចំនួននៃគំរូគឺតិចពេកឬច្រើនពេក។
អនុសាសន៍៖ អនុវត្តការបន្ថយជម្រាលលីនេអ៊ែរនៃគំរូ ហើយជ្រើសរើសការប្រមូលផ្តុំគំរូជាមួយនឹងឥទ្ធិពល PCR ដ៏ល្អបំផុតសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិត។
NTC មានតម្លៃ fluorescence ខ្ពស់ពេក
1.Reagent contamination បង្កឡើងកំឡុងពេលប្រតិបត្តិការ។
ការណែនាំ៖ ជំនួសដោយសារធាតុថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិត។
2.Contamination បានកើតឡើងកំឡុងពេលរៀបចំប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម PCR ។
ការណែនាំ៖ ចាត់វិធានការការពារចាំបាច់ក្នុងអំឡុងពេលប្រតិបត្តិការ ដូចជា៖ ពាក់ស្រោមដៃជ័រ ដោយប្រើចុងបំពង់ជាមួយតម្រង។ល។
3. primers ត្រូវបាន degraded ហើយការ degradation នៃ primers នឹងបណ្តាលឱ្យ amplification មិនជាក់លាក់។
ការណែនាំ៖ ប្រើ Electrophoresis SDS-PAGE ដើម្បីរកមើលថាតើ primers ត្រូវបានបន្ទាបបន្ថោកហើយជំនួសវាដោយ primers ថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិត។
primer dimer ឬ amplification មិនជាក់លាក់
1. កំហាប់ Mg2+ មិនសមរម្យទេ។
អនុសាសន៍៖ កំហាប់ Mg2+ នៃ 2 × Real PCR EasyTM Mix ដែលយើងផ្តល់គឺ 3.5 mM ។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ សម្រាប់ primers និងគំរូពិសេសមួយចំនួន កំហាប់ Mg2+ អាចខ្ពស់ជាង។ដូច្នេះ អ្នកអាចបន្ថែម MgCl2 ដោយផ្ទាល់ ដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពកំហាប់ Mg2+ ។វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យបង្កើន Mg2+ 0.5mM រាល់ពេលសម្រាប់ការបង្កើនប្រសិទ្ធភាព។
2.The PCR annealing temperature ទាបពេក។
ការណែនាំ៖ បង្កើនសីតុណ្ហភាព PCR annealing 1 ℃ ឬ 2 ℃ រាល់ពេល។
3. ផលិតផល PCR វែងពេក។
អនុសាសន៍៖ រយៈពេលនៃផលិតផល PCR ពេលវេលាពិតគួរតែមានចន្លោះពី 100-150bp មិនលើសពី 500bp ។
4.The primers ត្រូវបាន degraded ហើយការរិចរិលនៃ primers នឹងនាំឱ្យមានរូបរាងនៃ amplification ជាក់លាក់។
ការណែនាំ៖ ប្រើ Electrophoresis SDS-PAGE ដើម្បីរកមើលថាតើ primers ត្រូវបានបន្ទាបបន្ថោកហើយជំនួសវាដោយ primers ថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិត។
5. ប្រព័ន្ធ PCR មិនត្រឹមត្រូវ ឬប្រព័ន្ធតូចពេក។
ការណែនាំ៖ ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម PCR តូចពេកនឹងធ្វើឱ្យភាពត្រឹមត្រូវនៃការរកឃើញថយចុះ។វាជាការល្អបំផុតក្នុងការប្រើប្រព័ន្ធប្រតិកម្មដែលបានណែនាំដោយឧបករណ៍ PCR បរិមាណ ដើម្បីដំណើរការការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិតឡើងវិញ។
ភាពអាចធ្វើឡើងវិញបានខ្សោយនៃតម្លៃបរិមាណ
1. ឧបករណ៍ដំណើរការខុសប្រក្រតី។
ការណែនាំ៖ វាអាចមានកំហុសរវាងរន្ធ PCR នីមួយៗនៃឧបករណ៍ ដែលបណ្តាលឱ្យមានការផលិតឡើងវិញមិនល្អក្នុងអំឡុងពេលគ្រប់គ្រងសីតុណ្ហភាព ឬការរកឃើញ។សូមពិនិត្យតាមការណែនាំរបស់ឧបករណ៍ដែលត្រូវគ្នា។
2. ភាពបរិសុទ្ធគំរូគឺមិនល្អទេ។
អនុសាសន៍៖ សំណាកដែលមិនបរិសុទ្ធនឹងនាំទៅរកភាពមិនអាចផលិតឡើងវិញនៃការពិសោធន៍ ដែលរួមមានភាពបរិសុទ្ធនៃគំរូ និង primers ។វាជាការល្អបំផុតក្នុងការបន្សុតគំរូឡើងវិញ ហើយ primers ត្រូវបានបន្សុតល្អបំផុតដោយ SDS-PAGE ។
3. ការរៀបចំប្រព័ន្ធ PCR និងពេលវេលាផ្ទុកគឺវែងពេក។
ការណែនាំ៖ ប្រើប្រព័ន្ធ PCR ពេលវេលាពិតសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីការរៀបចំ ហើយកុំទុកវាចោលយូរពេក។
4. លក្ខខណ្ឌនៃការពង្រីក PCR គឺមិនសមស្របទេ ហើយលំដាប់បឋម ឬការប្រមូលផ្តុំគឺមិនត្រឹមត្រូវ។
ការណែនាំ៖ បញ្ជាក់ពីភាពត្រឹមត្រូវនៃលំដាប់ primer ហើយ primer មិនត្រូវបានបន្ទាបបន្ថោកទេ។ប្រសិនបើសញ្ញា amplification មិនល្អ សូមព្យាយាមបន្ថយសីតុណ្ហភាព annealing និងលៃតម្រូវកំហាប់ primer ឱ្យបានត្រឹមត្រូវ។
5. ប្រព័ន្ធ PCR មិនត្រឹមត្រូវ ឬប្រព័ន្ធតូចពេក។
ការណែនាំ៖ ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម PCR តូចពេកនឹងធ្វើឱ្យភាពត្រឹមត្រូវនៃការរកឃើញថយចុះ។វាជាការល្អបំផុតក្នុងការប្រើប្រព័ន្ធប្រតិកម្មដែលបានណែនាំដោយឧបករណ៍ PCR បរិមាណ ដើម្បីដំណើរការការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិតឡើងវិញ។
