Foreasy HS Taq DNA Polymerase
ការពិពណ៌នាកញ្ចប់៖
◮ភាពជាក់លាក់ខ្ពស់៖ អង់ស៊ីមដែលមានសកម្មភាពចាប់ផ្តើមក្តៅខ្លាំង។
◮ការពង្រីកលឿន៖ ១០ វិនាទី/គីឡូបៃ។
◮អាដាប់ធ័រគំរូខ្ពស់៖ អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីពង្រីកយ៉ាងមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់។GCតម្លៃនិងគំរូ DNA ដែលពិបាកពង្រីក។
◮ភាពស្មោះត្រង់ខ្លាំង៖ ភាពស្មោះត្រង់មាន ៦ ដងof អង់ស៊ីម Taq ធម្មតា។
ការពិពណ៌នា
Foreasy HS Taq DNA Polymerase គឺជាអង់ស៊ីម Taq ថ្មីដែលបង្ហាញនៅក្នុងបាក់តេរីវិស្វកម្ម Escherichia coli ដោយបច្ចេកវិទ្យាផ្សំហ្សែន។បន្ទាប់ពីអង់ស៊ីមត្រូវបានព្យាបាលដោយដំណើរការពិសេសមួយ។'សកម្មភាពរបស់ s ត្រូវបានរារាំងមុនពេលដំណើរការកម្ដៅ ដោយហេតុនេះរារាំងការពង្រីកមិនជាក់លាក់ដែលបណ្តាលមកពីការមិនជាក់លាក់នៃ primers ឬ primer dimers នៅក្រោមលក្ខខណ្ឌសីតុណ្ហភាពទាប។ផលិតផលនេះគឺសមរម្យសម្រាប់ PCR React ជាក់លាក់ខ្ពស់។អ៊ីយ៉ុង, M ultiple x PCR , មាតិកា GC ខ្ពស់ (> 60%) ,ជាមួយរចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំឬផ្សេងទៀត។ហ្សែនផ្ទៃខាងក្រោយខ្លាំងអាយស៊ីកamplification និង genom ខ្នាតធំអាយស៊ីកការរកឃើញការពង្រីក។អង់ស៊ីមមានសកម្មភាព 5' → 3' DNA polymerase និង 5' → 3' សកម្មភាព exonuclease ប៉ុន្តែមិនមាន 3' → 5' សកម្មភាព exonuclease ។
សមាសធាតុនៃកញ្ចប់
| សមាសភាគ | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 5000 U (1 មីលីលីត្រ) | 50 KU (10 មីលីលីត្រ) | 500 KU (100 មីលីលីត្រ) |
| 2 × Taq សតិបណ្ដោះអាសន្នប្រតិកម្ម | 25ml × 5 | 250ml × 5 | 500 mL × 25 |
លក្ខណៈពិសេស & គុណសម្បត្តិ
- ភាពជាក់លាក់ខ្ពស់៖ អង់ស៊ីមដែលមានសកម្មភាពចាប់ផ្តើមក្តៅខ្លាំង។
- ការពង្រីកលឿន៖ 10 វិនាទី/គីឡូបៃ។
- ភាពប្រែប្រួលនៃគំរូខ្ពស់៖ អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីពង្រីកយ៉ាងមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់។GCតម្លៃនិងគំរូ DNA ដែលពិបាកពង្រីក។
- ភក្ដីភាពខ្លាំង៖ ភាពស្មោះត្រង់មាន ៦ ដងof អង់ស៊ីម Taq ធម្មតា។
កម្មវិធីកញ្ចប់
- ប្រព័ន្ធ PCR/qPCR ផ្សេងៗ និងប្រព័ន្ធ PCR ផ្ទាល់
- PCR Amplified បំណែក DNA
- សញ្ញាសម្គាល់ DNA
- លំដាប់ DNA
- PCR បូក A កន្ទុយ
និយមន័យសកម្មភាព
1U: បរិមាណអង់ស៊ីមដែលត្រូវការដើម្បីបញ្ចូល 10 nmol នៃឌីអិនអេចូលទៅក្នុងបញ្ហាមិនរលាយអាស៊ីតដោយប្រើ DNA មេជីវិតឈ្មោលត្រី salmon ដែលបានធ្វើឱ្យសកម្មជាគំរូ / primer, 74 ° C, 30 នាទី។
លក្ខខណ្ឌប្រតិកម្ម
| សីតុណ្ហភាព | ពេលវេលាប្រតិកម្ម | ពេលវេលាវដ្ត |
| ៣៧ អង្សាសេ | 5 នាទី | 1 |
| ៩៤ អង្សាសេ | 5 នាទី | 1 |
| ៩៤ អង្សាសេ | 10 វិ | 40 |
| 60°C | 10 វិ |
ចំណាំ៖សម្រាប់ប្រព័ន្ធ 10 µL និង 20 µL បន្ថែមបរិមាណស្មើគ្នានៃប្រេងរ៉ែប្រសិនបើម៉ាស៊ីនកំដៅមិនមានគម្របកំដៅ។
លក្ខខណ្ឌប្រតិកម្ម PCR ប្រែប្រួលអាស្រ័យលើលក្ខខណ្ឌរចនាសម្ព័ន្ធនៃគំរូ primers និងផ្សេងទៀត។នៅក្នុងប្រតិបត្តិការជាក់លាក់ ចាំបាច់ត្រូវរៀបចំលក្ខខណ្ឌប្រតិកម្មដ៏ល្អប្រសើរ រួមមានសីតុណ្ហភាព annealing, extension time ជាដើម ដោយយោងទៅតាមលក្ខខណ្ឌជាក់លាក់ដូចជា ប្រភេទគំរូ ទំហំនៃបំណែកគោលដៅ លំដាប់មូលដ្ឋាននៃបំណែក amplified និងមាតិកា GC និងប្រវែងនៃ primer ។
ការផ្ទុក
-20 ± 5 °C សម្រាប់រយៈពេល 2 ឆ្នាំឬនៅ -80 ° C សម្រាប់ការផ្ទុករយៈពេលវែង។
មិនមានសញ្ញាពង្រីក
1.Taq DNA Polymerase នៅក្នុងឧបករណ៍បាត់បង់សកម្មភាពរបស់វា ដោយសារការផ្ទុកមិនត្រឹមត្រូវ ឬផុតកំណត់នៃកញ្ចប់។
អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់លក្ខខណ្ឌផ្ទុករបស់ឧបករណ៍;បន្ថែមបរិមាណសមស្របនៃ Taq DNA Polymerase ទៅប្រព័ន្ធ PCR ឬទិញឧបករណ៍ PCR ពេលវេលាពិតថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ពាក់ព័ន្ធ។
2. មានសារធាតុរារាំងជាច្រើននៃ Taq DNA Polymerase នៅក្នុងគំរូ DNA ។
ការណែនាំ៖ សម្អាតគំរូឡើងវិញ ឬកាត់បន្ថយចំនួនពុម្ពដែលបានប្រើ។
3. កំហាប់ Mg2+ មិនសមរម្យទេ។
អនុសាសន៍៖ កំហាប់ Mg2+ នៃ 2× Real PCR Mix ដែលយើងផ្តល់គឺ 3.5mM ។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ សម្រាប់ primers និងគំរូពិសេសមួយចំនួន កំហាប់ Mg2+ អាចខ្ពស់ជាង។ដូច្នេះ អ្នកអាចបន្ថែម MgCl2 ដោយផ្ទាល់ ដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពកំហាប់ Mg2+ ។វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យបង្កើន Mg2+ 0.5mM រាល់ពេលសម្រាប់ការបង្កើនប្រសិទ្ធភាព។
4. លក្ខខណ្ឌនៃការពង្រីក PCR គឺមិនសមស្របទេ ហើយលំដាប់បឋម ឬការប្រមូលផ្តុំគឺមិនត្រឹមត្រូវ។
ការណែនាំ៖ បញ្ជាក់ពីភាពត្រឹមត្រូវនៃលំដាប់ primer ហើយ primer មិនត្រូវបានបន្ទាបបន្ថោកទេ។ប្រសិនបើសញ្ញា amplification មិនល្អ សូមព្យាយាមបន្ថយសីតុណ្ហភាព annealing និងលៃតម្រូវកំហាប់ primer ឱ្យបានត្រឹមត្រូវ។
5. ចំនួននៃគំរូគឺតិចពេកឬច្រើនពេក។
អនុសាសន៍៖ អនុវត្តការបន្ថយជម្រាលលីនេអ៊ែរនៃគំរូ ហើយជ្រើសរើសការប្រមូលផ្តុំគំរូជាមួយនឹងឥទ្ធិពល PCR ដ៏ល្អបំផុតសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិត។
NTC មានតម្លៃ fluorescence ខ្ពស់ពេក
1.Reagent contamination បង្កឡើងកំឡុងពេលប្រតិបត្តិការ។
ការណែនាំ៖ ជំនួសដោយសារធាតុថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិត។
2.Contamination បានកើតឡើងកំឡុងពេលរៀបចំប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម PCR ។
ការណែនាំ៖ ចាត់វិធានការការពារចាំបាច់ក្នុងអំឡុងពេលប្រតិបត្តិការ ដូចជា៖ ពាក់ស្រោមដៃជ័រ ដោយប្រើចុងបំពង់ជាមួយតម្រង។ល។
3. primers ត្រូវបាន degraded ហើយការ degradation នៃ primers នឹងបណ្តាលឱ្យ amplification មិនជាក់លាក់។
ការណែនាំ៖ ប្រើ Electrophoresis SDS-PAGE ដើម្បីរកមើលថាតើ primers ត្រូវបានបន្ទាបបន្ថោកហើយជំនួសវាដោយ primers ថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិត។
primer dimer ឬ amplification មិនជាក់លាក់
1. កំហាប់ Mg2+ មិនសមរម្យទេ។
អនុសាសន៍៖ កំហាប់ Mg2+ នៃ 2 × Real PCR EasyTM Mix ដែលយើងផ្តល់គឺ 3.5 mM ។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ សម្រាប់ primers និងគំរូពិសេសមួយចំនួន កំហាប់ Mg2+ អាចខ្ពស់ជាង។ដូច្នេះ អ្នកអាចបន្ថែម MgCl2 ដោយផ្ទាល់ ដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពកំហាប់ Mg2+ ។វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យបង្កើន Mg2+ 0.5mM រាល់ពេលសម្រាប់ការបង្កើនប្រសិទ្ធភាព។
2.The PCR annealing temperature ទាបពេក។
ការណែនាំ៖ បង្កើនសីតុណ្ហភាព PCR annealing 1 ℃ ឬ 2 ℃ រាល់ពេល។
3. ផលិតផល PCR វែងពេក។
អនុសាសន៍៖ រយៈពេលនៃផលិតផល PCR ពេលវេលាពិតគួរតែមានចន្លោះពី 100-150bp មិនលើសពី 500bp ។
4.The primers ត្រូវបាន degraded ហើយការរិចរិលនៃ primers នឹងនាំឱ្យមានរូបរាងនៃ amplification ជាក់លាក់។
ការណែនាំ៖ ប្រើ Electrophoresis SDS-PAGE ដើម្បីរកមើលថាតើ primers ត្រូវបានបន្ទាបបន្ថោកហើយជំនួសវាដោយ primers ថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិត។
5. ប្រព័ន្ធ PCR មិនត្រឹមត្រូវ ឬប្រព័ន្ធតូចពេក។
ការណែនាំ៖ ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម PCR តូចពេកនឹងធ្វើឱ្យភាពត្រឹមត្រូវនៃការរកឃើញថយចុះ។វាជាការល្អបំផុតក្នុងការប្រើប្រព័ន្ធប្រតិកម្មដែលបានណែនាំដោយឧបករណ៍ PCR បរិមាណ ដើម្បីដំណើរការការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិតឡើងវិញ។
ភាពអាចធ្វើឡើងវិញបានខ្សោយនៃតម្លៃបរិមាណ
1. ឧបករណ៍ដំណើរការខុសប្រក្រតី។
ការណែនាំ៖ វាអាចមានកំហុសរវាងរន្ធ PCR នីមួយៗនៃឧបករណ៍ ដែលបណ្តាលឱ្យមានការផលិតឡើងវិញមិនល្អក្នុងអំឡុងពេលគ្រប់គ្រងសីតុណ្ហភាព ឬការរកឃើញ។សូមពិនិត្យតាមការណែនាំរបស់ឧបករណ៍ដែលត្រូវគ្នា។
2. ភាពបរិសុទ្ធគំរូគឺមិនល្អទេ។
អនុសាសន៍៖ សំណាកដែលមិនបរិសុទ្ធនឹងនាំទៅរកភាពមិនអាចផលិតឡើងវិញនៃការពិសោធន៍ ដែលរួមមានភាពបរិសុទ្ធនៃគំរូ និង primers ។វាជាការល្អបំផុតក្នុងការបន្សុតគំរូឡើងវិញ ហើយ primers ត្រូវបានបន្សុតល្អបំផុតដោយ SDS-PAGE ។
3. ការរៀបចំប្រព័ន្ធ PCR និងពេលវេលាផ្ទុកគឺវែងពេក។
ការណែនាំ៖ ប្រើប្រព័ន្ធ PCR ពេលវេលាពិតសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីការរៀបចំ ហើយកុំទុកវាចោលយូរពេក។
4. លក្ខខណ្ឌនៃការពង្រីក PCR គឺមិនសមស្របទេ ហើយលំដាប់បឋម ឬការប្រមូលផ្តុំគឺមិនត្រឹមត្រូវ។
ការណែនាំ៖ បញ្ជាក់ពីភាពត្រឹមត្រូវនៃលំដាប់ primer ហើយ primer មិនត្រូវបានបន្ទាបបន្ថោកទេ។ប្រសិនបើសញ្ញា amplification មិនល្អ សូមព្យាយាមបន្ថយសីតុណ្ហភាព annealing និងលៃតម្រូវកំហាប់ primer ឱ្យបានត្រឹមត្រូវ។
5. ប្រព័ន្ធ PCR មិនត្រឹមត្រូវ ឬប្រព័ន្ធតូចពេក។
ការណែនាំ៖ ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម PCR តូចពេកនឹងធ្វើឱ្យភាពត្រឹមត្រូវនៃការរកឃើញថយចុះ។វាជាការល្អបំផុតក្នុងការប្រើប្រព័ន្ធប្រតិកម្មដែលបានណែនាំដោយឧបករណ៍ PCR បរិមាណ ដើម្បីដំណើរការការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិតឡើងវិញ។
