កញ្ចប់ RT-qPCR ផ្ទាល់
ការពិពណ៌នា
កញ្ចប់ RT-qPCR ផ្ទាល់ផ្តល់នូវការវេចខ្ចប់ដោយឡែកពីគ្នានូវសតិបណ្ដោះអាសន្ន RT-qPCR និងអង់ស៊ីមដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់ល្បាយ (Taq, M-MLV, RI) ដែលធ្វើឱ្យវាងាយស្រួលសម្រាប់ការបង្កើតឧបករណ៍និងប្រព័ន្ធខាងក្រោយការកែតម្រូវ, នៅក្នុងការផ្ទៀងផ្ទាត់សាមញ្ញ។
លក្ខណៈបច្ចេកទេស
500T, 50,000T
សមាសធាតុនៃកញ្ចប់
មាតិកាកញ្ចប់ (ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម 20 μL) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 ធ | 50,000 ធី | |
ល្បាយអង់ស៊ីមដោយផ្ទាល់ | 500 μL×1 | 50 មីលីលីត្រ×1 |
2 × ដោយផ្ទាល់ RT-qPCR Buffer | 1 មីលីលីត្រ×5 | 500 មីលីលីត្រ×1 |
ការណែនាំ | 1 | 1 |
ជំហានប្រតិបត្តិការ
មុនពេលរៀបចំ reagent, reagents ទាំងអស់នៅក្នុងឧបករណ៍គួរតែត្រូវបាន thawed នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ និងលាយបញ្ចូលគ្នាថ្នមៗ។
A: រៀបចំ of គំរូ និង សារធាតុប្រតិកម្ម
1. រៀបចំគំរូ RNA ដែលបានរៀបចំ (វាត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើឧបករណ៍ស៊េរី Foregene Total RNA Isolation Kit series ដើម្បីស្រង់ចេញ និងបន្សុទ្ធគំរូ RNA) ឬផលិតផលបំបែកគំរូ (វាត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើប្រព័ន្ធ Foregene Lysis) primers ជាក់លាក់ (10 μM) និងឧបករណ៍ប្រើប្រាស់ពាក់ព័ន្ធផ្សេងទៀត។
2. ដាក់ 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O និង 20× ROX Reference Dye (ប្រសិនបើវា'ត្រូវការ) ក្នុងប្រអប់ជាមួយទឹកកក ធ្វើឱ្យវត្ថុទាំងនេះរលាយតាមធម្មជាតិ ហើយលាយបញ្ចូលគ្នាថ្នមៗ។
B: រៀបចំ of RT-qPCR ប្រព័ន្ធ
តុ 1 : រៀបចំ of RT-qPCR sប្រព័ន្ធ
សមាសភាគ | កម្រិតសំឡេង | ការផ្តោតអារម្មណ៍ចុងក្រោយ |
2 × ដោយផ្ទាល់ RT-qPCR Buffer | 10 μL | 1 × |
ល្បាយអង់ស៊ីមដោយផ្ទាល់ | ១μL | |
បឋមបញ្ជូនបន្ត (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
ថ្នាំ primer បញ្ច្រាស (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
ការស៊ើបអង្កេត (4 μM) | ១μL | 200nM |
គំរូ (RNA ឬ Lysate) | X μL | |
20 × ROX ថ្នាំលាបយោង | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
បរិមាណសរុប | ២០μL |
C: កំណត់ នេះ។ RT-qPCR ប្រតិកម្ម កម្មវិធី
តុ 2 : RT-qPCR ប្រតិកម្មon កម្មវិធី ការកំណត់ (សម្រាប់ ឧទាហរណ៍: ពីរ-ជំហាន វិធីសាស្រ្ត)
ជំហាន | សីតុណ្ហភាព | ពេលវេលា | វដ្ត | មាតិកា | |
1 | 50 ℃ | 15 នាទី | 1* | 1 | ប្រតិចារិកបញ្ច្រាស |
2 | ៩៥ អង្សាសេ | 1 នាទី | 1 | មុន denaturation | |
3 | ៩៥ អង្សាសេ | 10 វិ | ៤០-៤៥ | ការប្រែពណ៌ | |
60 ℃ | 30 វិនាទី 2* | Anneal/Extension |
ការផ្ទុកនិងអាយុកាលធ្នើ
- កញ្ចប់ត្រូវរក្សាទុកនៅ -20± 5℃.រយៈពេលសុពលភាពគឺ 12 ខែ។
- ជៀសវាងការកកម្តងហើយម្តងទៀត (<5 វដ្ត)។