ដោយផ្ទាល់ RT-qPCR Kit II
ការពិពណ៌នាកញ្ចប់៖
◮Direct RT-qPCR Kit ដោយប្រើ Foreasy Reverse Transcriptase និង Foreasy HS Taq DNA Polymerase ដែលអភិវឌ្ឍដោយ Foregene ជាមួយនឹងសតិបណ្ដោះអាសន្នប្រតិកម្មពិសេស ធ្វើឱ្យឧបករណ៍នេះមានភាពធន់ទ្រាំខ្លាំង និងភាពឆបគ្នា ហើយវាអាចសាកល្បងប្រតិកម្មដោយផ្ទាល់ដោយប្រើប្រព័ន្ធ Foregene Lysis ជាគំរូ។កញ្ចប់នេះអាចអនុវត្តសម្រាប់ឧបករណ៍រកអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក COVID-19 និងការបង្កើតឧបករណ៍រកឃើញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកបាក់តេរីបង្កជំងឺផ្សេងៗទៀត។
ការពិពណ៌នា
កញ្ចប់ RT-qPCR ផ្ទាល់ផ្តល់នូវសតិបណ្ដោះអាសន្ន RT-qPCR ដែលបានខ្ចប់ដាច់ដោយឡែក ប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់ Foreasy HS Taq DNA Polymeraseនិង Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),ធ្វើឱ្យវាមានភាពងាយស្រួលសម្រាប់ការបង្កើតឧបករណ៍ខាងក្រោយ និងការកែតម្រូវប្រព័ន្ធ នៅក្នុងការផ្ទៀងផ្ទាត់សាមញ្ញ។
Direct RT-qPCR Kit ដោយប្រើ Foreasy Reverse Transcriptase និង Foreasy HS Taq DNA Polymerase ដែលអភិវឌ្ឍដោយ Foregene ជាមួយនឹងសតិបណ្ដោះអាសន្នប្រតិកម្មពិសេស ធ្វើឱ្យឧបករណ៍នេះមានភាពធន់ទ្រាំខ្លាំង និងភាពឆបគ្នា ហើយវាអាចសាកល្បងប្រតិកម្មដោយផ្ទាល់ដោយប្រើប្រព័ន្ធ Foregene Lysis ជាគំរូ។កញ្ចប់នេះអាចអនុវត្តសម្រាប់ឧបករណ៍រកអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក COVID-19 និងការបង្កើតឧបករណ៍រកឃើញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកបាក់តេរីបង្កជំងឺផ្សេងៗទៀត។
កញ្ចប់នេះអាចជាធាតុផ្សំនៃផលិតផល IVD ដោយផ្ទាល់ ដោយប្រើប្រាស់យ៉ាងងាយស្រួល និងរហ័ស។វាគ្រាន់តែត្រូវការការផ្ទៀងផ្ទាត់យ៉ាងងាយស្រួល ដោយមិនចាំបាច់អភិវឌ្ឍម្តងទៀត។
លក្ខណៈបច្ចេកទេស
500T, 50,000T
សមាសធាតុនៃកញ្ចប់
| មាតិកាកញ្ចប់ (ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម 20 μL) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 ធ | 50,000 ធី | |
| Foreasy Rប្រតិចារិកជារៀងរហូត (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 មីលីលីត្រ×5 |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 មីលីលីត្រ×10 |
| 2 × RT-qPCR ផ្ទាល់សតិបណ្ដោះអាសន្ន | 1 មីលីលីត្រ × 5 | 500ml ×1 |
| ការណែនាំ | 1 | 1 |
ជំហានប្រតិបត្តិការ
ចម្លើយ៖ រៀបចំគំរូ និងសារធាតុប្រតិកម្ម
1. រៀបចំគំរូ RNA ដែលបានរៀបចំ (វាត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើឧបករណ៍ស៊េរី Foregene Total RNA Isolation Kit series ដើម្បីស្រង់ចេញ និងបន្សុទ្ធគំរូ RNA) ឬផលិតផលបំបែកគំរូ (វាត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើប្រព័ន្ធ Foregene Lysis) ថ្នាំ primers ជាក់លាក់ (10 μM) និងឧបករណ៍ប្រើប្រាស់ពាក់ព័ន្ធផ្សេងទៀត។
2. ដាក់ 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O និង 20× ROX Reference Dye (ប្រសិនបើចាំបាច់) ក្នុងប្រអប់ជាមួយទឹកកក ធ្វើឱ្យវត្ថុទាំងនេះរលាយតាមធម្មជាតិ ហើយលាយបញ្ចូលគ្នាថ្នមៗ។
ខ៖ រៀបចំប្រព័ន្ធ RT-qPCR
ទទួលបានពាក់កណ្តាលនៃបរិមាណនៃសតិបណ្ដោះអាសន្ននៃប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម (ឧទាហរណ៍ប្រសិនបើបរិមាណនៃប្រព័ន្ធគឺ 20 μL វាចាំបាច់ត្រូវទទួលបាន 10 μL 2 × Direct RT-qPCR Buffer). សម្រាប់បរិមាណអង់ស៊ីមដែលត្រូវគ្នា។, យើងស្នើឱ្យប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម M-MLV: 10-30 U/20 μL,តាកDNA polymerase:ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម 1-2 U/20 μLនេះជាការណែនាំរបស់យើង អ្នកគួរតែសាកល្បង និងកែតម្រូវវា។) បន្ថែមគំរូ RNA, primers និង probes ជាក់លាក់ ហើយបន្ថែម RNase-Free ddH2O ទៅ 20 μL។ការរៀបចំជាក់លាក់នៃប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម RT-qPCR អាចត្រូវបានយោងទៅតារាងខាងក្រោម 1 ។
តារាងទី 1: រៀបចំប្រព័ន្ធ RT-qPCR
| សមាសភាគ | កម្រិតសំឡេង | ការផ្តោតអារម្មណ៍ចុងក្រោយ |
| 2 × ដោយផ្ទាល់ RT-qPCR Buffer | 10 μL | 1 × |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase | 1-2 U | |
| បឋមបញ្ជូនបន្ត (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| ថ្នាំ primer បញ្ច្រាស (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
| ការស៊ើបអង្កេត (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| គំរូ (RNA ឬ Lysate) | X μL | |
| 20 × ROX Reference Dye | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| បរិមាណសរុប | 20 μL |
ចំណាំ៖ Forward Primer និង Reverse Primer គឺជា primer ជាក់លាក់នៃហ្សែនគោលដៅ។ប្រព័ន្ធនៃ qPCR អាចត្រូវបានកែតម្រូវតាមគំរូពិសោធន៍ជាក់ស្តែង និង PCR ។យើងណែនាំ 400nM សម្រាប់ការប្រមូលផ្តុំចុងក្រោយនៃ primers ភាគច្រើន។លៃតម្រូវកម្រិតសំឡេងនៃ primers និង probes ជាក់លាក់យោងទៅតាមការប្រមូលផ្តុំដែលបានរៀបចំ និងការផ្តោតអារម្មណ៍ចុងក្រោយដែលបានណែនាំ។
1*: ជ្រើសរើសកំហាប់ចុងក្រោយដែលសមស្របនៃ ROX Reference Dye យោងទៅតាមឧបករណ៍ PCR បរិមាណផ្សេងៗគ្នា។កំហាប់ថ្នាំជ្រលក់យោង ROX ល្អបំផុតនៃឧបករណ៍ PCR បរិមាណទូទៅត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាងខាងក្រោម៖
| ឧបករណ៍ PCR បរិមាណ | ការប្រមូលផ្តុំចុងក្រោយនៃ ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/ជំហានទីមួយ,ល។ | 1 × (ឧទាហរណ៍ បន្ថែម 1μl 20 × ROX Reference Dye នៅក្នុងប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P និង Mx4000 ជាដើម។ | 0.5 × (ឧទាហរណ៍ បន្ថែម 0.5μl 20 × ROX Reference Dye នៅក្នុងប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម 20 μL) |
| ឧបករណ៍ Roche PCR ឧបករណ៍ Bio-Rad PCR ឧបករណ៍ Eppendorf បរិមាណ PCR ជាដើម។ | ដោយគ្មានថ្នាំជ្រលក់យោង ROX |
ការផ្ទុកនិងអាយុកាលធ្នើ
ឧបករណ៍គួរតែត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -20 ± 5 ℃។វាគួរតែត្រូវបានរក្សាទុកភ្លាមៗនៅក្នុងទូទឹកកក -20 ℃។រយៈពេលសុពលភាពគឺ 2 ឆ្នាំប្រសិនបើវាត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងលក្ខខណ្ឌសមរម្យ។
