ការណែនាំអំពីការវិភាគបញ្ហា

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

ទិន្នផលទាប ឬគ្មាន DNA

ជាធម្មតាមានកត្តាជាច្រើនដែលជះឥទ្ធិពលដល់ទិន្នផលនៃ DNA ហ្សែន រួមទាំងប្រភពនៃគំរូ អាយុនៃគំរូ លក្ខខណ្ឌផ្ទុកនៃគំរូ និងប្រតិបត្តិការ។

DNA ហ្សែនមិនអាចទទួលបានកំឡុងពេលទាញយក

1. សំណាកជាលិកាត្រូវបានរក្សាទុកមិនត្រឹមត្រូវ ឬរក្សាទុកយូរពេក ដែលបណ្តាលឱ្យមានការរិចរិលនៃ DNA ហ្សែន។

អនុសាសន៍៖ ទុកសំណាកជាលិកាក្នុងអាសូតរាវ ឬ -20°គ;ព្យាយាមប្រើសំណាកដែលប្រមូលបានថ្មីសម្រាប់ការទាញយក DNA ហ្សែន។

2. ចំនួនគំរូតិចពេកអាចបណ្តាលឱ្យ DNA ហ្សែនដែលត្រូវគ្នាមិនត្រូវបានស្រង់ចេញ។

ការណែនាំ៖ សម្រាប់សំណាកជាលិកាដែលត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងរយៈពេលយូរ ឬមានការខូចទ្រង់ទ្រាយ DNA ធ្ងន់ធ្ងរ បរិមាណនៃសំណាកជាលិកាអាចត្រូវបានកើនឡើងយ៉ាងសមស្រប ដើម្បីទាញយក DNA ហ្សែនយ៉ាងច្រើន។បរិមាណសំណាកអាចត្រូវបានកំណត់ដោយយោងទៅតាមតម្រូវការ DNA ប៉ុន្តែសំណាកស្រស់មិនគួរលើសពី 100mg ហើយសំណាកស្ងួតមិនគួរលើសពី 30mg។

3. គំរូមិនត្រូវបានដីជាមួយអាសូតរាវ ឬដាក់យូរពេកបន្ទាប់ពីអាសូតរាវ។

ការណែនាំ៖ កំឡុងពេលទាញយក DNA គំរូត្រូវមានដីពេញលេញជាមួយអាសូតរាវ ដើម្បីបំបែកជញ្ជាំងកោសិកា។បន្ទាប់ពីកិនរួច សូមផ្ទេរម្សៅគំរូទៅ PL1 preheated នៅ 65°C ឱ្យបានឆាប់តាមដែលអាចធ្វើទៅបាន (នៅពេលដែលម្សៅដីត្រូវបានរលាយ DNA ហ្សែននឹងចាប់ផ្តើមថយចុះយ៉ាងឆាប់រហ័ស) ។

4. ការផ្ទុកមិនត្រឹមត្រូវនៃ Foregene Protease បណ្តាលឱ្យសកម្មភាពថយចុះ ឬអសកម្ម។

អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់លក្ខខណ្ឌផ្ទុករបស់ Foregene Protease ឬជំនួសវាដោយ Foregene Protease ថ្មីសម្រាប់អ៊ីដ្រូសែនអង់ស៊ីម។

5. ឧបករណ៍នេះត្រូវបានរក្សាទុកមិនត្រឹមត្រូវ ឬរក្សាទុកយូរពេក ដែលបណ្តាលឱ្យសមាសធាតុមួយចំនួននៅក្នុងឧបករណ៍មិនដំណើរការ។

ការណែនាំ៖ ទិញឧបករណ៍ទាញយក DNA ហ្សែនរុក្ខជាតិថ្មីសម្រាប់ប្រតិបត្តិការពាក់ព័ន្ធ។

6. ការប្រើប្រាស់ឧបករណ៍មិនត្រឹមត្រូវ។

ការណែនាំ៖ ទិញឧបករណ៍ញែក DNA របស់រុក្ខជាតិឧទ្ទិសដល់សំណាកសម្រាប់ការទាញយក និងបន្សុទ្ធ DNA ហ្សែនរបស់រុក្ខជាតិ។

7. Buffer WB ដោយមិនចាំបាច់បន្ថែម aគ្មានជាតិទឹក។ អេតាណុល

អនុសាសន៍៖ សូមប្រាកដថាត្រូវបន្ថែមបរិមាណត្រឹមត្រូវនៃអេតាណុលដាច់ខាតទៅ Buffer WB ។

8. វត្ថុធាតុមិនត្រូវបានគេស្រក់លើភ្នាសស៊ីលីកាត្រឹមត្រូវ។

ការណែនាំ៖ បន្ថែមធាតុដែលបានកំដៅមុននៅ 65℃ទម្លាក់​ទៅ​កណ្តាល​ភ្នាស​ស៊ីលីកា​ជែល ហើយ​ទុក​វា​នៅ​សីតុណ្ហភាព​បន្ទប់​រយៈពេល 5 នាទី​ដើម្បី​បង្កើន​ប្រសិទ្ធភាព​នៃ​ការ​បញ្ចេញ​ពន្លឺ។

ការស្រង់ចេញដើម្បីទទួលបាន DNA ហ្សែនដែលមានទិន្នផលទាប

1. គំរូត្រូវបានរក្សាទុកមិនត្រឹមត្រូវ ឬរក្សាទុកយូរពេក ដែលបណ្តាលឱ្យមានការរិចរិលនៃ DNA ហ្សែន។

អនុសាសន៍: ទុកសំណាកជាលិកានៅ -20℃;ព្យាយាមប្រើគំរូជាលិកាដែលប្រមូលបានថ្មីសម្រាប់ការទាញយក DNA ហ្សែន។

2. ប្រសិនបើបរិមាណសំណាកជាលិកាតូចពេក DNA ហ្សែនដែលបានស្រង់ចេញនឹងមានតិចជាង។

ការណែនាំ៖ សំណាករុក្ខជាតិខ្លះសម្បូរទឹក ដូចជារុក្ខជាតិក្នុងទឹក ដូចជាសារាយជាដើម កម្រិតថ្នាំអាចត្រូវបានបង្កើនឱ្យសមស្រប ឬទឹកអាចខ្សោះជាតិទឹកបន្តិចមុនពេលប្រតិបត្តិការ។

3. សំណាកមិនត្រូវបានកិនយ៉ាងហ្មត់ចត់ជាមួយអាសូតរាវ ឬត្រូវបានទុកនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់យូរពេកបន្ទាប់ពីការកិន។

ការណែនាំ៖ ការកិនអាសូតរាវត្រូវតែគ្រប់គ្រាន់ ហើយជញ្ជាំងកោសិកាគំរូគួរតែត្រូវបានបំបែកឱ្យបានច្រើនតាមដែលអាចធ្វើទៅបាន។ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីការកិនម្សៅគំរូគួរតែត្រូវបានផ្ទេរទៅ 65℃preheated Buffer PL1 សម្រាប់ជំហានបន្ទាប់។

4. មិនប្រើឧបករណ៍ត្រឹមត្រូវ។

ការណែនាំ៖ ប្រើឧបករណ៍ដាច់ដោយឡែក DNA របស់រុក្ខជាតិដើម្បីទាញយក និងបន្សុទ្ធ DNA ហ្សែនរបស់រុក្ខជាតិ។

5. ការផ្ទុកមិនត្រឹមត្រូវនៃ Foregene Protease បណ្តាលឱ្យសកម្មភាពថយចុះ ឬអសកម្ម។

អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់លក្ខខណ្ឌផ្ទុករបស់ Foregene Protease ឬជំនួសវាដោយ Foregene Protease ថ្មីសម្រាប់អ៊ីដ្រូសែនអង់ស៊ីម។

6. បញ្ហាអច្ឆរិយៈ

អនុសាសន៍៖ សូមប្រើ Buffer EB សម្រាប់ elution;ប្រសិនបើប្រើ ddH₂O ឬវត្ថុស័ក្តិសិទ្ធិផ្សេងទៀត ត្រូវប្រាកដថា pH នៃវត្ថុស័ក្តិសិទ្ធិស្ថិតនៅចន្លោះ 7.0-8.5។

7. វត្ថុស័ក្តិសិទ្ធិមិនត្រូវបានជ្រលក់ត្រឹមត្រូវ។

ការណែនាំ៖ សូមបន្ថែមការទម្លាក់ elution ទៅក្នុងពាក់កណ្តាលនៃភ្នាសស៊ីលីកា ហើយទុកវានៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់រយៈពេល 5 នាទី ដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាព elution ។

8. បរិមាណ eluent គឺតូចពេក

ការណែនាំ៖ សូមប្រើ eluent សម្រាប់ការ elution DNA ហ្សែន យោងតាមការណែនាំ យ៉ាងហោចណាស់មិនតិចជាង 100μl.

ស្រង់ចេញ DNA ហ្សែនជាមួយនឹងភាពបរិសុទ្ធទាប

ភាពបរិសុទ្ធទាបនៃ DNA ហ្សែននឹងនាំទៅរកការបរាជ័យ ឬឥទ្ធិពលមិនល្អនៃការពិសោធន៍ខាងក្រោម ដូចជា៖ អង់ស៊ីមមិនអាចកាត់បាន ហើយបំណែកហ្សែនគោលដៅមិនអាចទទួលបានដោយ PCR ទេ។

1. ការចម្លងរោគប្រូតេអ៊ីនផ្សេងៗ ការចម្លងរោគ RNA ។

ការវិភាគ៖ Buffer PW មិនត្រូវបានប្រើដើម្បីលាងជួរឈរទេ។Buffer PW មិនត្រូវបានប្រើដើម្បីលាងសម្អាតជួរឈរក្នុងល្បឿន centrifugation ត្រឹមត្រូវ។

ការណែនាំ៖ ព្យាយាមធានាថាមិនមានទឹកភ្លៀងនៅក្នុង supernatant នៅពេលដែល supernatant ត្រូវបានឆ្លងកាត់ជួរឈរ។ត្រូវប្រាកដថាលាងសម្អាតជួរឈរបន្សុតដោយប្រើ Buffer PW តាមការណែនាំ ហើយជំហាននេះមិនអាចលុបចោលបានទេ។

2. ការបំពុលអ៊ីយ៉ុងមិនបរិសុទ្ធ។

ការវិភាគ៖ ជួរឈរលាងសម្អាត Buffer WB ត្រូវបានលុបចោល ឬលាងតែម្តងប៉ុណ្ណោះ ដែលបណ្តាលឱ្យមានការចម្លងរោគអ៊ីយ៉ុងដែលនៅសេសសល់។

ការណែនាំ៖ ត្រូវប្រាកដថាត្រូវលាងសម្អាតពីរដងជាមួយ Buffer WB យោងតាមការណែនាំដើម្បីលុបអ៊ីយ៉ុងដែលនៅសេសសល់តាមដែលអាចធ្វើទៅបាន។

3. ការចម្លងរោគ RNase ។

ការវិភាគ៖ Exogenous RNase ត្រូវបានបន្ថែមទៅ Buffer;ប្រតិបត្តិការបោកគក់មិនត្រឹមត្រូវនៅក្នុង Buffer PW នឹងបណ្តាលឱ្យមានសំណល់ RNase និងប៉ះពាល់ដល់ប្រតិបត្តិការពិសោធន៍ RNA ខាងក្រោម ដូចជាការចម្លងនៅក្នុង vitro ជាដើម។

ការណែនាំ៖ ឧបករណ៍ទាញយកអាស៊ីត nucleic ស៊េរី Foregene អាចយក RNA ចេញដោយគ្មាន RNase បន្ថែម ហើយសារធាតុប្រតិកម្មទាំងអស់នៅក្នុង Plant DNA Isolation Kit មិនត្រូវការ RNase ទេ។ត្រូវប្រាកដថាលាងសម្អាតជួរឈរបន្សុតដោយប្រើ Buffer PW តាមការណែនាំ ហើយជំហាននេះមិនអាចលុបចោលបានទេ។

4. សំណល់អេតាណុល។

ការវិភាគ៖ បន្ទាប់ពីលាងសម្អាតជួរឈរបន្សុតដោយប្រើ Buffer WB គ្មានការផ្ចិតបំពង់ទទេត្រូវបានអនុវត្តទេ។

អនុសាសន៍៖ អនុវត្តតាមការណែនាំសម្រាប់ការផ្ចិតបំពង់ទទេត្រឹមត្រូវ។

សៀវភៅណែនាំ៖

សៀវភៅណែនាំអំពីឧបករណ៍ញែក DNA របស់រុក្ខជាតិ