ការណែនាំសម្រាប់ការវិភាគបញ្ហា

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

គ្មាន RNA អាចត្រូវបានស្រង់ចេញឬទិន្នផលនៃអាស៊ីត nucleic មានកម្រិតទាប

ជាធម្មតាមានកត្តាជាច្រើនដែលប៉ះពាល់ដល់ប្រសិទ្ធភាពនៃការស្តារឡើងវិញ ដូចជា៖ មាតិកា RNA គំរូ វិធីសាស្រ្តនៃប្រតិបត្តិការ បរិមាណ elution ជាដើម។

ការវិភាគមូលហេតុទូទៅ៖

1. ការងូតទឹកកក ឬ centrifugation សីតុណ្ហភាពទាប (4 ° C) កំឡុងពេលប្រតិបត្តិការ។

ការណែនាំ៖ ប្រតិបត្តិការសីតុណ្ហភាពក្នុងបន្ទប់ (១៥-២៥ អង្សារសេ) មិនត្រូវងូតទឹកទឹកកក និងម៉ាស៊ីនត្រជាក់សីតុណ្ហភាពទាបឡើយ។

2. ការផ្ទុកគំរូមិនត្រឹមត្រូវ ឬការផ្ទុកគំរូយូរពេក។

ការណែនាំ៖ ទុកសំណាកគំរូនៅ -80 ° C ឬបង្កកក្នុងអាសូតរាវ ហើយជៀសវាងការប្រើទឹកកកម្តងហើយម្តងទៀត។ព្យាយាមប្រើសំណាកដែលប្រមូលបានថ្មីៗសម្រាប់ការទាញយក RNA ។

3.Lys គំរូមិនគ្រប់គ្រាន់

អនុសាសន៍៖ សូមប្រាកដថាសំណាក និងដំណោះស្រាយដំណើរការ (Linear Acrylamide) ត្រូវបានលាយបញ្ចូលគ្នាយ៉ាងហ្មត់ចត់ និង incubated រយៈពេល 10 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (15-25 ° C)

4.The eluent ត្រូវបានបន្ថែមមិនត្រឹមត្រូវ

អនុសាសន៍៖ ត្រូវប្រាកដថា RNase-Free ddH2O ត្រូវបានបន្ថែមទៅពាក់កណ្តាលនៃភ្នាសនៃជួរឈរបន្សុត។

5. បរិមាណអេតាណុលគ្មានជាតិទឹកមិនត្រឹមត្រូវនៅក្នុង Buffer viRW2

ការណែនាំ៖ សូមធ្វើតាមការណែនាំ បន្ថែមបរិមាណត្រឹមត្រូវនៃអេតាណុលគ្មានជាតិទឹកទៅក្នុង Buffer viRW2 ហើយលាយវាឱ្យបានល្អមុនពេលប្រើឧបករណ៍។

6. ការប្រើប្រាស់គំរូមិនត្រឹមត្រូវ។

ការណែនាំ៖ 200µl នៃគំរូក្នុង 500μl នៃ Buffer viRL ។បរិមាណសំណាកច្រើនហួសប្រមាណនឹងនាំឱ្យអត្រាការទាញយក RNA ថយចុះ។

7.Improper elution volume ឬ elution មិនពេញលេញ។

ការណែនាំ: បរិមាណដ៏ច្រើននៃជួរឈរបន្សុតគឺ 30-50μl;ប្រសិនបើឥទ្ធិពល elution មិនពេញចិត្ត វាត្រូវបានណែនាំឱ្យបន្ថែម RNase-Free ddH ដែលត្រូវបានកំដៅជាមុន₂O និងពង្រីកពេលវេលាដាក់នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ ដូចជា 5-10min

8.Purification column មានសំណល់អេតាណុលបន្ទាប់ពីលាងសម្អាតនៅក្នុង Buffer viRW2។

ការណែនាំ៖ ប្រសិនបើអេតាណុលនៅតែមានបន្ទាប់ពីការលាងសម្អាតនៅក្នុង Buffer viRW2 និង centrifugation បំពង់ទទេរយៈពេល 2 នាទី នោះជួរឈរបន្សុតអាចទុកចោលនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់រយៈពេល 5 នាទីបន្ទាប់ពីការ centrifugation បំពង់ទទេដើម្បីយកអេតាណុលដែលនៅសល់ចេញ។

ការរិចរិលនៃម៉ូលេគុល RNA បន្សុត

គុណភាពនៃ RNA បន្សុតគឺទាក់ទងទៅនឹងកត្តាដូចជាការផ្ទុកគំរូ ការចម្លងរោគ RNase និងប្រតិបត្តិការ។

ការវិភាគមូលហេតុទូទៅ៖

1.គំរូដែលប្រមូលបានមិនត្រូវបានរក្សាទុកទាន់ពេលទេ។

ការណែនាំ: ប្រសិនបើគំរូមិនត្រូវបានប្រើក្នុងពេលវេលាបន្ទាប់ពីការប្រមូលសូមទុកវានៅ -80 ℃ឬអាសូតរាវភ្លាមៗ។សម្រាប់ការទាញយកម៉ូលេគុល RNA ព្យាយាមប្រើសំណាកដែលប្រមូលបានថ្មីៗនៅពេលណាដែលអាចធ្វើទៅបាន។

2.សំណាកដែលប្រមូលបានត្រូវត្រជាក់ និងរលាយម្តងហើយម្តងទៀត។

ការណែនាំ៖ ជៀសវាងការបង្កក និងការរលាយម្តងហើយម្តងទៀត (មិនលើសពីមួយដង) កំឡុងពេលប្រមូល និងរក្សាទុកគំរូ បើមិនដូច្នេះទេ ទិន្នផលនៃអាស៊ីត nucleic នឹងថយចុះ។

3.RNase ត្រូវបានណែនាំនៅក្នុងបន្ទប់វះកាត់ ឬគ្មានស្រោមដៃ របាំងមុខ ជាដើមត្រូវបានពាក់។

ការណែនាំ៖ ការទាញយកការពិសោធន៍ម៉ូលេគុល RNA ត្រូវបានអនុវត្តយ៉ាងល្អបំផុតនៅក្នុងបន្ទប់ប្រតិបត្តិការ RNA ដាច់ដោយឡែក ហើយតារាងពិសោធន៍ត្រូវបានសម្អាតមុនពេលពិសោធន៍។ពាក់ស្រោមដៃ និងរបាំងដែលអាចចោលបានក្នុងអំឡុងពេលពិសោធន៍ ដើម្បីជៀសវាងការរិចរិល RNA ដែលបណ្តាលមកពីការណែនាំ RNase ។

4. សារធាតុប្រតិកម្មត្រូវបានបំពុលដោយ RNase កំឡុងពេលប្រើប្រាស់។

ការណែនាំ៖ ជំនួសដោយ Viral RNA Isolation Kit ថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ដែលពាក់ព័ន្ធ។

5.The RNase contamination of the centrifuge tubes, pipette tips,ល

ម៉ូលេគុល RNA បន្សុតបានប៉ះពាល់ដល់ការពិសោធន៍ខាងក្រោម

ម៉ូលេគុល RNA ដែលត្រូវបានបន្សុតដោយជួរឈរបន្សុតនឹងប៉ះពាល់ដល់ការពិសោធន៍ខាងក្រោម ប្រសិនបើមានអ៊ីយ៉ុងអំបិល ឬប្រូតេអ៊ីនច្រើនពេក ដូចជា៖ ការចម្លងបញ្ច្រាស បូលីតខាងជើង ជាដើម។

1. មានអ៊ីយ៉ុងអំបិលដែលនៅសល់នៅក្នុងម៉ូលេគុល RNA ដែលត្រូវបានដកចេញ។

អនុសាសន៍៖ ត្រូវប្រាកដថាបរិមាណអេតាណុលគ្មានជាតិទឹកត្រឹមត្រូវត្រូវបានបន្ថែមទៅ Buffer viRW2 ហើយលាងសម្អាតជួរឈរបន្សុតពីរដងតាមល្បឿន centrifugation ត្រឹមត្រូវតាមការណែនាំប្រតិបត្តិការ។បន្ទាប់មកធ្វើការ centrifugation ដើម្បីលុបការបំពុលអ៊ីយ៉ុងអំបិលក្នុងកម្រិតធំបំផុត

2. មានអេតាណុលដែលនៅសល់នៅក្នុងម៉ូលេគុល RNA ដែលត្រូវបានដកចេញ

ការណែនាំ៖ នៅពេលដែលបញ្ជាក់ថា ជួរឈរបន្សុតត្រូវបានលាងសម្អាតដោយ Buffer viRW2 ធ្វើការ centrifugation បំពង់ទទេ យោងទៅតាមល្បឿន centrifugal នៅលើការណែនាំប្រតិបត្តិការ។ប្រសិនបើនៅមានអេតាណុលនៅសេសសល់ វាអាចត្រូវបានទុកចោលរយៈពេល 5 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ បន្ទាប់ពីការ centrifugation បំពង់ទទេ ដើម្បីយកអេតាណុលដែលនៅសេសសល់ចេញក្នុងកម្រិតធំបំផុត។

សៀវភៅណែនាំ៖

សៀវភៅណែនាំអំពី Viral RNA Isolation Kit