Escherichia Coli O157: សំណុំឧបករណ៍រកឃើញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីក H7 (វិធីសាស្ត្រ PCR Fluorescent Probe/Lyophilization)
ការពិពណ៌នាកញ្ចប់៖
Cat.No.FP103
វាត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការរកឃើញ និងពិនិត្យយ៉ាងឆាប់រហ័សនៃ E. coli O157:H7 ក្នុងអាហារ ចំណី គំរូទឹក និងសំណាកបរិស្ថាន។
ការពិពណ៌នា
វាត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការរកឃើញ និងពិនិត្យយ៉ាងរហ័សនៃ E. coli O157:H7 នៅក្នុងអាហារ ចំណី គំរូទឹក និងសំណាកបរិស្ថាន។
[គោលការណ៍ធ្វើតេស្ត]
យោងតាមគោលការណ៍នៃបច្ចេកវិទ្យា fluorescent PCR សារធាតុ primers ជាក់លាក់ និងការស៊ើបអង្កេត Taqman ត្រូវបានរចនាឡើងសម្រាប់ហ្សែនជាក់លាក់នៃ Escherichia coli O157:H7 និងបានរកឃើញដោយឧបករណ៍ fluorescent PCR ដូច្នេះដើម្បីដឹងពីការរកឃើញនៃ Escherichia coli O157: H7 ការរកឃើញគុណភាពនៃ DNA ។
មាតិកាកញ្ចប់
ចំណាំ៖ ការស៊ើបអង្កេតឆានែល ROX មិនត្រូវបានរួមបញ្ចូលទេ។
| Cសមាសធាតុ | ការបញ្ជាក់ | Qបរិមាណ |
| Buffer A | បំពង់ | 1 |
| សតិបណ្ដោះអាសន្ន ខ | បំពង់ | 1 |
| ការត្រួតពិនិត្យជាវិជ្ជមាន | បំពង់ | 1 |
| ការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមាន | បំពង់ | 1 |
ការប្រើប្រាស់រំពឹងទុក
វាត្រូវបានប្រើសម្រាប់ ការរកឃើញ និងពិនិត្យយ៉ាងរហ័សនៃ E. coli O157:H7 នៅក្នុងអាហារ ចំណី គំរូទឹក និងសំណាកបរិស្ថាន។
លក្ខខណ្ឌផ្ទុក និងកាលបរិច្ឆេទផុតកំណត់
រក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព -20 ℃ក្នុងទីងងឹត ហើយជៀសវាងការបង្កក និងរលាយម្តងទៀត។
រយៈពេលសុពលភាពគឺ 12ខែ ហើយកាលបរិច្ឆេទផលិតត្រូវបានបង្ហាញនៅលើវេចខ្ចប់ខាងក្រៅ។
ឧបករណ៍ និងសម្ភារៈប្រើប្រាស់
ឧបករណ៍ PCR បរិមាណ fluorescent, កាំភ្លើង pipette និងគន្លឹះដែលត្រូវគ្នា, vortex shaker, mini centrifuge ។
ការប្រើប្រាស់
1. ដំណើរការគំរូ
1.1 ប្រភេទគំរូ៖ ឧបករណ៍នេះសមស្របសម្រាប់អាហារ ចំណី គំរូទឹក និងសំណាកផ្សេងទៀតដែលសង្ស័យថាមានការបំពុលដោយ Escherichia coli O157:H7 ។សម្រាប់ផលិតផលសាច់ដែលកែច្នៃយ៉ាងជ្រៅ ភេសជ្ជៈ និងសារធាតុផ្សេងទៀតដែលមានសារធាតុពណ៌ ពួកគេត្រូវលាងសម្អាត ដើម្បីកុំឱ្យប៉ះពាល់ដល់ការប្រមូលផ្តុំសញ្ញា fluorescence ។
1.2 ដំណើរការគំរូ៖ យោងទៅ "GB 4789.10-2016 សុវត្ថិភាពចំណីអាហារ ស្តង់ដារជាតិ ការពិនិត្យមីក្រូជីវសាស្រ្តចំណីអាហារ Escherichia coli O157: H7" សម្រាប់ការរៀបចំគំរូ ការពង្រឹងវប្បធម៌ និងការញែកចេញពី Escherichia coli O157: H7 ។
- Nការទាញយកអាស៊ីត ukleic
យក 20 mL នៃដំណោះស្រាយ enrichment ក្នុងបំពង់ centrifuge 1.5 mL បន្ថែម 200 μL នៃ microbial lysate (ត្រូវការឧបករណ៍បន្ថែម) vortex រយៈពេល 30 វិនាទី centrifuge ខ្លីៗ ហើយទុកឡែក។
ចំណាំ៖ ការទាញយកអាស៊ីត nucleic ចេញពី lysate គួរតែបញ្ចប់ក្នុងរយៈពេល 10 នាទី ហើយមិនអាចរក្សាទុកបានយូរនោះទេ។
3. ការពង្រីកអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ែរ
3.1 បើកឧបករណ៍ PCR បរិមាណ fluorescent សម្រាប់ប្រើប្រាស់។
Buffer A និង Buffer B ពីឧបករណ៍ រលាយពួកវាយ៉ាងហ្មត់ចត់ ហើយដាក់កណ្តាលដោយសង្ខេប។បន្ថែម 18 μL Buffer A និង 2 μL Buffer B ទៅក្នុងបំពង់ប្រតិកម្ម PCR នីមួយៗ។បន្ទាប់មកបន្ថែម 5 mL នៃការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមាននីមួយៗ អាស៊ីត nucleic ដែលបានទាញយក និងការគ្រប់គ្រងវិជ្ជមានទៅក្នុងបំពង់ប្រតិកម្ម PCR បិទបំពង់ និង centrifuge យ៉ាងខ្លី។
3.3 ផ្ទេរបំពង់ប្រតិកម្ម PCR ទៅម៉ាស៊ីន fluorescent PCR ហើយប្រើនីតិវិធីខាងក្រោមដើម្បីធ្វើការពិសោធន៍ពង្រីក៖ ជ្រើសរើស 25 mL សម្រាប់ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម ប្រមូលសញ្ញា fluorescence នៅសីតុណ្ហភាព 60°C សម្រាប់វដ្តនីមួយៗ ហើយជ្រើសរើស FAM សម្រាប់ឆានែលរាវរក។
| ជំហាន | កម្មវិធី | ចំនួនវដ្ត |
| 1 | ៣៧ ℃ ៥ នាទី | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 នាទី | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 40 |
| 60 ℃ 30 s (ប្រមូល fluorescence) |
ការណែនាំសម្រាប់ការវិភាគបញ្ហា
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
គ្មាន RNA អាចត្រូវបានស្រង់ចេញឬទិន្នផលនៃអាស៊ីត nucleic មានកម្រិតទាប
ជាធម្មតាមានកត្តាជាច្រើនដែលប៉ះពាល់ដល់ប្រសិទ្ធភាពនៃការស្តារឡើងវិញ ដូចជា៖ មាតិកា RNA គំរូ វិធីសាស្រ្តនៃប្រតិបត្តិការ បរិមាណ elution ជាដើម។
ការវិភាគមូលហេតុទូទៅ៖
1. ការងូតទឹកកក ឬ centrifugation សីតុណ្ហភាពទាប (4 ° C) កំឡុងពេលប្រតិបត្តិការ។
ការណែនាំ៖ ប្រតិបត្តិការសីតុណ្ហភាពក្នុងបន្ទប់ (១៥-២៥ អង្សារសេ) មិនត្រូវងូតទឹកទឹកកក និងម៉ាស៊ីនត្រជាក់សីតុណ្ហភាពទាបឡើយ។
2. ការផ្ទុកគំរូមិនត្រឹមត្រូវ ឬការផ្ទុកគំរូយូរពេក។
ការណែនាំ៖ ទុកសំណាកគំរូនៅ -80 ° C ឬបង្កកក្នុងអាសូតរាវ ហើយជៀសវាងការប្រើទឹកកកម្តងហើយម្តងទៀត។ព្យាយាមប្រើសំណាកដែលប្រមូលបានថ្មីៗសម្រាប់ការទាញយក RNA ។
3.Lys គំរូមិនគ្រប់គ្រាន់
អនុសាសន៍៖ សូមប្រាកដថាសំណាក និងដំណោះស្រាយដំណើរការ (Linear Acrylamide) ត្រូវបានលាយបញ្ចូលគ្នាយ៉ាងហ្មត់ចត់ និង incubated រយៈពេល 10 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (15-25 ° C)
4.The eluent ត្រូវបានបន្ថែមមិនត្រឹមត្រូវ
អនុសាសន៍៖ ត្រូវប្រាកដថា RNase-Free ddH2O ត្រូវបានបន្ថែមទៅពាក់កណ្តាលនៃភ្នាសនៃជួរឈរបន្សុត។
5. បរិមាណអេតាណុលគ្មានជាតិទឹកមិនត្រឹមត្រូវនៅក្នុង Buffer viRW2
ការណែនាំ៖ សូមធ្វើតាមការណែនាំ បន្ថែមបរិមាណត្រឹមត្រូវនៃអេតាណុលគ្មានជាតិទឹកទៅក្នុង Buffer viRW2 ហើយលាយវាឱ្យបានល្អមុនពេលប្រើឧបករណ៍។
6. ការប្រើប្រាស់គំរូមិនត្រឹមត្រូវ។
ការណែនាំ៖ 200µl នៃគំរូក្នុង 500μl នៃ Buffer viRL ។បរិមាណសំណាកច្រើនហួសប្រមាណនឹងនាំឱ្យអត្រាការទាញយក RNA ថយចុះ។
7.Improper elution volume ឬ elution មិនពេញលេញ។
ការណែនាំ: បរិមាណដ៏ច្រើននៃជួរឈរបន្សុតគឺ 30-50μl;ប្រសិនបើឥទ្ធិពល elution មិនពេញចិត្ត វាត្រូវបានណែនាំឱ្យបន្ថែម RNase-Free ddH ដែលត្រូវបានកំដៅជាមុន2O និងពង្រីកពេលវេលាដាក់នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ ដូចជា 5-10min
8.Purification column មានសំណល់អេតាណុលបន្ទាប់ពីលាងសម្អាតនៅក្នុង Buffer viRW2។
ការណែនាំ៖ ប្រសិនបើអេតាណុលនៅតែមានបន្ទាប់ពីការលាងសម្អាតនៅក្នុង Buffer viRW2 និង centrifugation បំពង់ទទេរយៈពេល 2 នាទី នោះជួរឈរបន្សុតអាចទុកចោលនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់រយៈពេល 5 នាទីបន្ទាប់ពីការ centrifugation បំពង់ទទេដើម្បីយកអេតាណុលដែលនៅសល់ចេញ។
ការរិចរិលនៃម៉ូលេគុល RNA បន្សុត
គុណភាពនៃ RNA បន្សុតគឺទាក់ទងទៅនឹងកត្តាដូចជាការផ្ទុកគំរូ ការចម្លងរោគ RNase និងប្រតិបត្តិការ។
ការវិភាគមូលហេតុទូទៅ៖
1.គំរូដែលប្រមូលបានមិនត្រូវបានរក្សាទុកទាន់ពេលទេ។
ការណែនាំ: ប្រសិនបើគំរូមិនត្រូវបានប្រើក្នុងពេលវេលាបន្ទាប់ពីការប្រមូលសូមទុកវានៅ -80 ℃ឬអាសូតរាវភ្លាមៗ។សម្រាប់ការទាញយកម៉ូលេគុល RNA ព្យាយាមប្រើសំណាកដែលប្រមូលបានថ្មីៗនៅពេលណាដែលអាចធ្វើទៅបាន។
2.សំណាកដែលប្រមូលបានត្រូវត្រជាក់ និងរលាយម្តងហើយម្តងទៀត។
ការណែនាំ៖ ជៀសវាងការបង្កក និងការរលាយម្តងហើយម្តងទៀត (មិនលើសពីមួយដង) កំឡុងពេលប្រមូល និងរក្សាទុកគំរូ បើមិនដូច្នេះទេ ទិន្នផលនៃអាស៊ីត nucleic នឹងថយចុះ។
3.RNase ត្រូវបានណែនាំនៅក្នុងបន្ទប់វះកាត់ ឬគ្មានស្រោមដៃ របាំងមុខ ជាដើមត្រូវបានពាក់។
ការណែនាំ៖ ការទាញយកការពិសោធន៍ម៉ូលេគុល RNA ត្រូវបានអនុវត្តយ៉ាងល្អបំផុតនៅក្នុងបន្ទប់ប្រតិបត្តិការ RNA ដាច់ដោយឡែក ហើយតារាងពិសោធន៍ត្រូវបានសម្អាតមុនពេលពិសោធន៍។ពាក់ស្រោមដៃ និងរបាំងដែលអាចចោលបានក្នុងអំឡុងពេលពិសោធន៍ ដើម្បីជៀសវាងការរិចរិល RNA ដែលបណ្តាលមកពីការណែនាំ RNase ។
4. សារធាតុប្រតិកម្មត្រូវបានបំពុលដោយ RNase កំឡុងពេលប្រើប្រាស់។
ការណែនាំ៖ ជំនួសដោយ Viral RNA Isolation Kit ថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ដែលពាក់ព័ន្ធ។
5.The RNase contamination of the centrifuge tubes, pipette tips,ល
ម៉ូលេគុល RNA បន្សុតបានប៉ះពាល់ដល់ការពិសោធន៍ខាងក្រោម
ម៉ូលេគុល RNA ដែលត្រូវបានបន្សុតដោយជួរឈរបន្សុតនឹងប៉ះពាល់ដល់ការពិសោធន៍ខាងក្រោម ប្រសិនបើមានអ៊ីយ៉ុងអំបិល ឬប្រូតេអ៊ីនច្រើនពេក ដូចជា៖ ការចម្លងបញ្ច្រាស បូលីតខាងជើង ជាដើម។
1. មានអ៊ីយ៉ុងអំបិលដែលនៅសល់នៅក្នុងម៉ូលេគុល RNA ដែលត្រូវបានដកចេញ។
អនុសាសន៍៖ ត្រូវប្រាកដថាបរិមាណអេតាណុលគ្មានជាតិទឹកត្រឹមត្រូវត្រូវបានបន្ថែមទៅ Buffer viRW2 ហើយលាងសម្អាតជួរឈរបន្សុតពីរដងតាមល្បឿន centrifugation ត្រឹមត្រូវតាមការណែនាំប្រតិបត្តិការ។បន្ទាប់មកធ្វើការ centrifugation ដើម្បីលុបការបំពុលអ៊ីយ៉ុងអំបិលក្នុងកម្រិតធំបំផុត
2. មានអេតាណុលដែលនៅសល់នៅក្នុងម៉ូលេគុល RNA ដែលត្រូវបានដកចេញ
ការណែនាំ៖ នៅពេលដែលបញ្ជាក់ថា ជួរឈរបន្សុតត្រូវបានលាងសម្អាតដោយ Buffer viRW2 ធ្វើការ centrifugation បំពង់ទទេ យោងទៅតាមល្បឿន centrifugal នៅលើការណែនាំប្រតិបត្តិការ។ប្រសិនបើនៅមានអេតាណុលនៅសេសសល់ វាអាចត្រូវបានទុកចោលរយៈពេល 5 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ បន្ទាប់ពីការ centrifugation បំពង់ទទេ ដើម្បីយកអេតាណុលដែលនៅសេសសល់ចេញក្នុងកម្រិតធំបំផុត។
សៀវភៅណែនាំ៖
សៀវភៅណែនាំអំពី Viral RNA Isolation Kit
