កញ្ចប់ DNA ដែលមិនមានកោសិកា
ការពិពណ៌នា
DNA គ្មានកោសិកា (cfDNA) គឺជាបំណែកនៃ cfDNA ដែលបញ្ចេញពីកោសិកាទៅក្នុងចរន្តឈាម ដែលអាចផ្ទុកព័ត៌មានជីវសាស្ត្រពីដុំសាច់ ភ្នាក់ងារបង្ករោគ និងទារក។ការវិភាគនៃ cfDNA ផ្តល់នូវសញ្ញាសម្គាល់សំខាន់ៗសម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ ការរកឃើញ និងការត្រួតពិនិត្យការវិវត្តនៃជំងឺស៊ីយ៉ូនបច្ចុប្បន្ននេះ បច្ចេកវិទ្យានេះត្រូវបានគេប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយនៅក្នុងវិស័យនៃការរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរដុំសាច់ ការណែនាំអំពីថ្នាំគោលដៅ និងការព្យាករណ៍។ការរកឃើញមេរោគ និងការពិនិត្យផ្ទៃពោះមិនរាតត្បាត។
កញ្ចប់ញែក DNA ដែលគ្មានកោសិកា Foregene ត្រូវបានរចនាឡើងសម្រាប់ញែក DNA ដែលគ្មានកោសិកាដែលដំណើរការដោយឡែក (cfDNA) ពីប្លាស្មារបស់មនុស្ស សេរ៉ូម សារធាតុរាវក្នុងខ្លួន ឬគំរូទឹកនោម។ឧបករណ៍នេះអាចញែក cfDNA យ៉ាងរហ័ស និងងាយស្រួលជាបីជំហាន៖ លីស/ការចង ការលាង និងការជំរះ។វាប្រើអង្កាំ superparamagnetic ស៊ីលីកាដែលរចនាឡើងជាពិសេសជាមួយនឹងប្រព័ន្ធ lysis/binding តែមួយគត់ដើម្បីស្ដារឡើងវិញនូវអាស៊ីត nucleic ដែលកំពុងចរាចរដោយការភ្ជាប់អ៊ីដ្រូសែន និងកម្លាំងអេឡិចត្រូស្តាត ដោយមិនស្រូបយកប្រូតេអ៊ីន និងសារធាតុមិនបរិសុទ្ធផ្សេងទៀត។វាស័ក្តិសមសម្រាប់ស្ថានីយការងារស្រង់ចេញដោយស្វ័យប្រវត្តិដែលមានចរន្តអគ្គិសនីខ្ពស់ក្នុងការរៀបចំសម្រាប់ការវិភាគចុះក្រោមដោយប្រើ PCR ឬ NGS។
មាតិកាកញ្ចប់ និងការផ្ទុក
តារាងទី 1 Foregene Cell- កញ្ចប់ញែក DNA ដោយឥតគិតថ្លៃ
COntents | Rឥស្សរជន | ចំនួនទឹកប្រាក់(25 T) | ចំនួនទឹកប្រាក់(50 T) | ចំនួនទឹកប្រាក់(១០០ T) | Sកម្លាំងពលកម្ម |
ប្រអប់១ | សតិបណ្ដោះអាសន្ន AL | 42mlx1ដប | 89mlx1ដប | 189mlx1ដប | 10-30°C |
Buffer AW1 | 38mlx1ដប | 83mlx1ដប | 165mlx1ដប | 10-30°C | |
Buffer AW2 | 15mlx1ដប | 33mlx1ដប | 66mlx1ដប | 10-30°C | |
Elution | 3mlx1ដប | 6mlx1ដប | 12mlx1ដប | 10-30°C | |
ប្រអប់ 2 | អង្កាំម៉ាញេទិក ក | 3 .2 mLx1 ដប | 6.5 mLx1 ដប | 13mlx1ដប | 2 - 8 ° C |
ប្រូតេអ៊ីន K | 5mlx1ដប | 10.5 mLx1 ដប | 21mlx1ដប | 2 - 8 ° C |
កំណត់ចំណាំ៖
[1] កុំលាយសមាសធាតុពីកញ្ចប់ផ្សេងៗគ្នា។
[2] Buffer AL អាចបង្កើតជា precipitates ដែលមិនប៉ះពាល់ដល់មុខងាររបស់វា។ប្រសិនបើឃើញទឹកភ្លៀង សូមដាក់ដបជ័រក្នុងទឹកដែលមានសីតុណ្ហភាព 56°C រយៈពេល 1 0 ទៅ 20 នាទី រហូតដល់ទឹកភ្លៀងរលាយ។បន្ទាប់មកលាយយ៉ាងហ្មត់ចត់មុនពេលប្រើ។
[3] កុំបង្កកមេដែក អេ។
នីតិវិធី
លក្ខណៈពិសេស & គុណសម្បត្តិ
-ការស្រង់ចេញប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព ទិន្នផលទាញយក DNA ខ្ពស់ ភាពបរិសុទ្ធល្អ ការដកយកចេញប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាពនៃសារធាតុមិនបរិសុទ្ធ និងថ្នាំទប់ស្កាត់ PCR ខាងក្រោម។
ការរួមបញ្ចូលគំរូដែលអាចបត់បែនបាន។ការស្រង់ចេញយ៉ាងងាយស្រួលនៃ cfDNA ពី 0.5mL ទៅ 4mL គំរូជាមួយនឹងបរិមាណ elution ទាបដល់ 20uL
កម្មវិធីចម្រុះមានសុពលភាពដោយសំណាកគ្លីនិក រចនាឡើងសម្រាប់ដុំសាច់ ការឆ្លងមេរោគ និងការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យមុនពេលសម្រាល ជាមួយនឹងការធ្វើកោសល្យវិច័យរាវ
ការគាំទ្រយ៉ាងទូលំទូលាយនៃវេទិកាស្វ័យប្រវត្តិ ឆបគ្នាជាមួយនីតិវិធីស្រង់ចេញដោយស្វ័យប្រវត្តិដោយដៃ គាំទ្រ Tecan, Hamilton, PE និងស្ថានីយការងារទាញយកអាស៊ីត nucleic ផ្សេងទៀត។