Buccal Swab/FTA Card Isolation Kit DNA Genomic Extraction or Purifiaction Kit ពី Buccal Swabs
ការពិពណ៌នាកញ្ចប់៖
សម្អាត DNA ហ្សែនដែលមានគុណភាពខ្ពស់យ៉ាងឆាប់រហ័សពីគំរូ buccal swab/FTA Card ។
◮គ្មានការចម្លងរោគ RNase៖DNA-Only Column ដែលផ្តល់ដោយឧបករណ៍ធ្វើឱ្យវាអាចដក RNA ចេញពី DNA ហ្សែនដោយមិនចាំបាច់បន្ថែម RNase ក្នុងអំឡុងពេលពិសោធន៍ ដោយការពារមន្ទីរពិសោធន៍ពីការបំពុលដោយ RNase exogenous ។
◮ល្បឿនលឿន៖Foregene Protease មានសកម្មភាពខ្ពស់ជាង protease ស្រដៀងគ្នា ហើយរំលាយសំណាកជាលិកាយ៉ាងឆាប់រហ័ស។ប្រតិបត្តិការនេះគឺសាមញ្ញ ហើយប្រតិបត្តិការទាញយក DNA ហ្សែនអាចត្រូវបានបញ្ចប់ក្នុងរយៈពេល 20-80 នាទី។
◮ងាយស្រួល៖ការផ្តោតអារម្មណ៍ត្រូវបានអនុវត្តនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ ហើយមិនចាំបាច់មាន 4°C សីតុណ្ហភាពទាប centrifugation ឬទឹកភ្លៀងអេតាណុលនៃ DNA នោះទេ។
◮សុវត្ថិភាព៖គ្មានការទាញយកសារធាតុសរីរាង្គត្រូវបានទាមទារ។
◮គុណភាពខ្ពស់:DNA ហ្សែនដែលបានស្រង់ចេញមានបំណែកធំ ៗ គ្មាន RNA គ្មាន RNase និងមាតិកាអ៊ីយ៉ុងទាបបំផុតដែលអាចបំពេញតាមតម្រូវការនៃការពិសោធន៍ផ្សេងៗ។
◮ប្រព័ន្ធមីក្រូ elution៖វាអាចបង្កើនកំហាប់នៃ DNA ហ្សែន ដែលងាយស្រួលសម្រាប់ការរកឃើញ ឬពិសោធន៍ខាងក្រោម។
ការពិពណ៌នា
កញ្ចប់នេះផ្តល់នូវវិធីសាស្រ្តដ៏មានប្រសិទ្ធភាព និងរហ័សក្នុងការទទួលបាន DNA ហ្សែនដែលមានកំហាប់ខ្ពស់ពី buccal swabs និង FTA Card (ចំណុចឈាម)។ការប្រើប្រាស់ក្រុមហ៊ុនរបស់យើង។'ជួរឈរ និងរូបមន្តនៃភ្នាសស៊ីលីកាដែលមានតែ DNA តែមួយគត់ រួមផ្សំជាមួយ Foregene Protease ការប្រមូលផ្តុំ DNA ហ្សែនដែលមានគុណភាពខ្ពស់អាចទាញយកបានក្នុងរយៈពេល 80 នាទី។ជួរឈរបន្សុតតូចដែលត្រូវបានរចនាយ៉ាងពិសេសចង DNA ហ្សែន ហើយ DNA អាចត្រូវបានដកចេញដោយចំនួនតិចតួច (15μl) ប្រព័ន្ធ elution ដើម្បីបង្កើនកំហាប់នៃ DNA ហ្សែនដែលទទួលបាន ដែលងាយស្រួលសម្រាប់ការរកឃើញ ឬពិសោធន៍ខាងក្រោម។ឧបករណ៍នេះអាចដំណើរការគំរូមួយ ឬច្រើនក្នុងពេលតែមួយ ហើយដំណើរការបន្សុតមិនតម្រូវឱ្យមានការទាញយកសារធាតុសរីរាង្គដូចជា phenol, chloroform និង isopropanol ឬទឹកភ្លៀងអេតាណុលដែលប្រើពេលច្រើននោះទេ ហើយប្រតិបត្តិការគឺសាមញ្ញ និងសន្សំសំចៃពេលវេលា។
លក្ខណៈបច្ចេកទេស
50 ការរៀបចំ
សមាសធាតុនៃកញ្ចប់
| Buffer ST1 |
| Buffer ST2 |
| អាគ្រីឡាមីតលីនេអ៊ែរ |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Foregene Protease |
| ជួរឈរតែមួយគត់ DNA |
| សេចក្តីណែនាំ |
លក្ខណៈពិសេស & គុណសម្បត្តិ
-គ្មានការចម្លងរោគ RNase៖ ជួរឈរតែមួយគត់ DNA ដែលផ្តល់ដោយឧបករណ៍ធ្វើឱ្យវាអាចយក RNA ចេញពី DNA ហ្សែនដោយមិនបន្ថែម RNase ក្នុងអំឡុងពេលពិសោធន៍ ជៀសវាងមន្ទីរពិសោធន៍ពីការបំពុលដោយ RNase ខាងក្រៅ។
- ល្បឿនលឿន៖ Foregene Protease មានសកម្មភាពខ្ពស់ជាង protease ស្រដៀងគ្នា រំលាយសំណាកបានយ៉ាងលឿន។ប្រតិបត្តិការសាមញ្ញ។
-ងាយស្រួល៖ ការចាប់ផ្ចិតត្រូវបានអនុវត្តនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ ហើយមិនចាំបាច់មាន 4°C សីតុណ្ហភាពទាប centrifugation ឬទឹកភ្លៀងអេតាណុលនៃ DNA នោះទេ។
-សុវត្ថិភាព៖ មិនទាមទារការស្រង់ចេញសារធាតុសរីរាង្គទេ។
គុណភាពខ្ពស់៖ DNA ហ្សែនដែលបានស្រង់ចេញមានបំណែកធំ គ្មាន RNA គ្មាន RNase និងមាតិកាអ៊ីយ៉ុងទាបខ្លាំង ដែលអាចបំពេញតម្រូវការនៃការពិសោធន៍ផ្សេងៗ។
-Micro-elution system៖ វាអាចបង្កើនកំហាប់នៃ DNA ហ្សែន ដែលងាយស្រួលសម្រាប់ការរកឃើញ ឬពិសោធន៍ខាងក្រោម។
កម្មវិធីកញ្ចប់
វាស័ក្តិសមសម្រាប់ការបន្សុត DNA ហ្សែនពីសំណាកដូចខាងក្រោមៈ ក្រដាស់បិទមាត់ កាត FTA (ស្នាមប្រឡាក់ឈាម)។
ការផ្ទុកនិងអាយុកាលធ្នើ
- កញ្ចប់នេះអាចរក្សាទុកបានរយៈពេល 12 ខែក្រោមលក្ខខណ្ឌស្ងួតនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (15-25°C);ប្រសិនបើវាត្រូវរក្សាទុកក្នុងរយៈពេលយូរជាងនេះ វាអាចរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 2-8°C ។
ចំណាំ៖ ប្រសិនបើទុកនៅសីតុណ្ហភាពទាប ដំណោះស្រាយងាយនឹងធ្លាក់ភ្លៀង។មុនពេលប្រើ ត្រូវប្រាកដថាដាក់សូលុយស្យុងក្នុងឧបករណ៍នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់មួយរយៈ។បើចាំបាច់ កំដៅវាក្នុងទឹក 37°C ទុករយៈពេល 10 នាទី ដើម្បីរំលាយទឹកភ្លៀង ហើយលាយវាមុនពេលប្រើ។
ដំណោះស្រាយ Foregene Protease មានរូបមន្តតែមួយគត់ដែលសកម្មនៅពេលរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់រយៈពេលយូរ (3 ខែ);សកម្មភាព និងស្ថេរភាពរបស់វានឹងកាន់តែប្រសើរនៅពេលរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 4°C ដូច្នេះវាត្រូវបានណែនាំអោយទុកវានៅសីតុណ្ហភាព 4°C កុំភ្លេចរក្សាវានៅ -20°C។
ជួរឈរបន្សុតត្រូវបានស្ទះ
នៅក្នុងឧបករណ៍នេះ ក្នុងប្រតិបត្តិការស្រង់ចេញ DNA ហ្សែន ជួរឈរបន្សុតត្រូវបានស្រូបយកដោយផ្ទាល់លើល្បាយ lysis enzymatic គំរូដោយគ្មានជំហាន centrifugation ហើយជួរឈរបន្សុតអាចនឹងត្រូវបានរារាំងដោយសារតែ enzymization មិនពេញលេញ និង viscosity ខ្ពស់នៃគំរូ។
មូលហេតុដែលអាចកើតមានមានដូចខាងក្រោម៖
1. ការរំលាយអាហារអង់ស៊ីមមិនពេញលេញនៃគំរូជាលិកា។
អនុសាសន៍៖ ពេលវេលាដំណើរការគំរូនៃ Foregene Protease អាចត្រូវបានពង្រីកដោយសមរម្យ ឬអាចយក supernatant បន្ទាប់ពីការ centrifugation នៅ 12,000 rpm (~13,400 × g) រយៈពេល 5 នាទី។
2. ការប្រើប្រាស់លើសនៃសំណាកជាលិកា ឬជាលិកាធំ។
អនុសាសន៍: វាជាការល្អបំផុតមិនឱ្យលើសពី 1 Buccal swab នៅក្នុងគំរូ;ប្រសិនបើគំរូមានទំហំធំពេក បង្កើនកម្រិតថ្នាំ Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 ទៅតាមនោះ។
3. viscosity គំរូគឺខ្ពស់ពេក។
អនុសាសន៍៖ គំរូអាចត្រូវបានពនលាយដោយ 10 mM នៃ Tris-HCl មុនពេលទាញយក DNA ហ្សែន។
4. បំណែកនៃកាតឈាមត្រូវបានបូម។
ការណែនាំ៖ ពេលវេលានៃការចាប់កណ្តាលបណ្តោះអាសន្ននៃជំហានទី 6 នៃការទាញយកហ្សែននៃកន្លែងឈាម (FTA Card) អាចត្រូវបានពង្រីកយ៉ាងសមស្រប។
ទិន្នផលទាប ឬគ្មាន DNA
ជារឿយៗមានកត្តាជាច្រើនដែលប៉ះពាល់ដល់ទិន្នផល DNA ហ្សែន រួមទាំងប្រភពដើមគំរូ លក្ខខណ្ឌផ្ទុកគំរូ ការរៀបចំគំរូ ការរៀបចំជាដើម។
DNA ហ្សែនមិនអាចទទួលបានកំឡុងពេលទាញយក
មូលហេតុដែលអាចកើតមានមានដូចខាងក្រោម៖
1. ការរក្សាទុកសំណាក ឬការផ្ទុកមិនត្រឹមត្រូវយូរពេកនាំទៅរកការបំផ្លាញ DNA ហ្សែន។
ការណែនាំ៖ ថង់ទឹកមាត់គួរតែយកគំរូថ្មីៗ ហើយវាមិនត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើ swabs ដែលបានរក្សាទុកសម្រាប់ប្រតិបត្តិការទាញយក DNA ហ្សែនទេ។សំណាកឈាមគួរតែធានាថាគុណភាពមានលក្ខណៈសម្បត្តិគ្រប់គ្រាន់ ហើយរយៈពេលផ្ទុកមិនគួរយូរពេកទេ។
2. ការប្រើប្រាស់ជាលិកាតិចតួចពេកអាចបណ្តាលឱ្យមិនមានការទាញយក DNA ហ្សែនដែលត្រូវគ្នា។
ការណែនាំ៖ អនុវត្តតាមការណែនាំអំពីការយកគំរូសំណាក buccal swab នៅក្នុងការណែនាំប្រតិបត្តិការ ហើយជូតឱ្យបានច្រើនដងតាមដែលអាចធ្វើបានដើម្បីឱ្យកោសិកាគ្រប់គ្រាន់អាចភ្ជាប់ទៅនឹងមាត់ធ្មេញសម្រាប់ការទាញយក DNA ហ្សែន។សម្រាប់ការស្រង់ចេញសំណាកឈាម តំបន់កាត់កន្លែងឈាមអាចត្រូវបានបង្កើនយ៉ាងសមស្រប។
3. Foregene Protease ត្រូវបានរក្សាទុកដោយមិនត្រឹមត្រូវ ដែលជាលទ្ធផលមានការថយចុះនៃសកម្មភាព ឬភាពអសកម្មរបស់វា។
អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់លក្ខខណ្ឌផ្ទុករបស់ Foregene Protease ឬជំនួសវាដោយ Foregene Protease ថ្មីសម្រាប់ប្រតិកម្មអង់ស៊ីម។
4. ការរក្សាទុកឧបករណ៍មិនត្រឹមត្រូវ ឬរយៈពេលផ្ទុកយូរពេក ដែលនាំឱ្យសមាសធាតុមួយចំនួននៅក្នុងឧបករណ៍មិនដំណើរការ។
ការណែនាំ៖ ទិញឧបករណ៍ញែក DNA ថ្មី Buccal swab សម្រាប់នីតិវិធីពាក់ព័ន្ធ។
5. Buffer WB មិនបន្ថែមអេតាណុលដាច់ខាត។
អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់ថាសតិបណ្ដោះអាសន្ន WB បន្ថែមបរិមាណត្រឹមត្រូវនៃអេតាណុលដាច់ខាត។
6. ភាពល្អិតល្អន់មិនត្រូវបានបន្ថែមត្រឹមត្រូវទៅក្នុងខ្សែភាពយន្តស៊ីលីកុនទេ។
ការណែនាំ៖ បន្ថែមដំណក់ទឹកដែលក្តៅមុនដល់ទៅ 65 អង្សារសេ ទៅពាក់កណ្តាលនៃភ្នាសស៊ីលីកូន ហើយទុកនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់រយៈពេល 5 នាទី ដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃការបញ្ចេញពន្លឺ។
DNA ហ្សែនទិន្នផលទាបដាច់ដោយឡែក
មូលហេតុដែលអាចកើតមានមានដូចខាងក្រោម៖
1. ការរក្សាទុកសំណាក ឬការផ្ទុកមិនត្រឹមត្រូវយូរពេកនាំទៅរកការបំផ្លាញ DNA ហ្សែន។
ការណែនាំ៖ ក្រដាសជូតមាត់ត្រូវបានគេយកជាគំរូថ្មីៗល្អជាង ហើយកន្សែងដែលរក្សាទុកមិនគួរប្រើសម្រាប់ការទាញយក DNA ហ្សែនទេ។
2. ប្រសិនបើបរិមាណនៃសំណាកជាលិកាតូចពេក មាតិកាហ្សែនហ្សែនដែលបានស្រង់ចេញនឹងមានតិចជាង។
ការណែនាំ៖ អនុវត្តតាមការណែនាំអំពីការយកគំរូតាមមាត់នៅក្នុងសៀវភៅណែនាំប្រតិបត្តិការ ដោយជូតឱ្យបានច្រើនដងតាមដែលអាចធ្វើទៅបាន ដើម្បីឱ្យកោសិកាគ្រប់គ្រាន់អាចភ្ជាប់ទៅនឹងមាត់ធ្មេញសម្រាប់ការទាញយក DNA ហ្សែន។
3. Foregene Protease ត្រូវបានរក្សាទុកដោយមិនត្រឹមត្រូវ ដែលជាលទ្ធផលមានការថយចុះនៃសកម្មភាព ឬភាពអសកម្មរបស់វា។
អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់លក្ខខណ្ឌផ្ទុករបស់ Foregene Protease ឬជំនួសវាដោយ Foregene Protease ថ្មីសម្រាប់ប្រតិកម្មអង់ស៊ីម។
4. បញ្ហាដែលពូកែ។
ការណែនាំ៖ ប្រើ Buffer EB សម្រាប់ elution;ប្រសិនបើប្រើ ddH2O ឬ eluents ផ្សេងទៀត បញ្ជាក់ថា pH នៃ eluate ស្ថិតនៅចន្លោះ 7.0-8.5 ។
5. eluate មិនត្រូវបានបន្ថែមត្រឹមត្រូវ dropwise ។
ការណែនាំ៖ បន្ថែមដំណក់ទឹកទៅកណ្តាលនៃភ្នាសស៊ីលីកុន ហើយទុកនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់រយៈពេល 5 នាទី ដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃការបញ្ចេញពន្លឺ។
6. សារធាតុរាវ elution កកកុញតិចពេក។
ការណែនាំ៖ ប្រើ eluent សម្រាប់ការ elution DNA ហ្សែន តាមតម្រូវការក្នុងការណែនាំ យ៉ាងហោចណាស់មិនតិចជាង 15 μl។
ភាពបរិសុទ្ធទាបនៃ DNA ហ្សែនដាច់ដោយឡែក
ភាពបរិសុទ្ធ DNA ហ្សែនទាបអាចនាំទៅរកការបរាជ័យ ឬលទ្ធផលមិនពេញចិត្តនៃការពិសោធន៍ខាងក្រោម ដូចជា៖ អង់ស៊ីមមិនអាចកាត់ចេញបានទេ PCR មិនអាចទទួលបានបំណែកហ្សែនដែលចាប់អារម្មណ៍។ល។
មូលហេតុដែលអាចកើតមានមានដូចខាងក្រោម៖
1. ការបំពុល Heteroprotein ការបំពុល RNA ។
ការវិភាគ៖ ជួរឈរបន្សុតមិនត្រូវបានលាងសម្អាតដោយប្រើ Buffer PW;ជួរឈរលាងសម្អាត Buffer PW មិនត្រូវបានលាងសម្អាតដោយប្រើល្បឿន centrifugal ត្រឹមត្រូវ។
អនុសាសន៍៖ ត្រូវប្រាកដថាមិនមានទឹកភ្លៀងនៅក្នុង supernatant មុនពេលបន្ថែមអេតាណុល។ត្រូវប្រាកដថាលាងសម្អាតជួរឈរបន្សុតតាមការណែនាំ ហើយជំហាននេះមិនអាចលុបចោលបានទេ។
2. ការបំពុលអ៊ីយ៉ុងមិនបរិសុទ្ធ។
ការវិភាគ៖ ជួរឈរលាងសម្អាត Buffer WB ត្រូវបានលុបចោល ឬលាងសម្អាតតែម្តងគត់ ដែលបណ្តាលឱ្យមានការចម្លងរោគអ៊ីយ៉ុងដែលនៅសេសសល់។
ការណែនាំ៖ ត្រូវប្រាកដថាត្រូវលាងសម្អាត Buffer WB 2 ដងតាមការណែនាំ ដើម្បីលុបអ៊ីយ៉ុងដែលនៅសេសសល់តាមដែលអាចធ្វើទៅបាន។
3. ការចម្លងរោគអង់ស៊ីម RNA ។
ការវិភាគ៖ RNases បរទេសត្រូវបានបន្ថែមទៅសតិបណ្ដោះអាសន្ន។ប្រតិបត្តិការលាងសម្អាត Buffer PW មិនត្រឹមត្រូវ ដែលបណ្តាលឱ្យមានសំណល់ RNase ប៉ះពាល់ដល់ប្រតិបត្តិការពិសោធន៍ RNA ខាងក្រោម ដូចជាការចម្លងនៅក្នុង vitro ជាដើម។
អនុសាសន៍៖ ឧបករណ៍ញែកអាស៊ីត nucleic ស៊េរី Foregene អាចយក RNA ចេញដោយមិនចាំបាច់បន្ថែម RNase ដូច្នេះ buccal Swab/FTA Card Isolation Kit DNA មិនចាំបាច់បន្ថែម RNase ទេ។ត្រូវប្រាកដថាធ្វើតាមការណែនាំសម្រាប់ជួរឈរសម្អាត Buffer PW ហើយជំហាននេះមិនអាចលុបចោលបានទេ។
4. សំណល់អេតាណុល។
ការវិភាគ៖ Buffer WB មិនបានធ្វើការ centrifugation បំពង់ទទេទេ បន្ទាប់ពីលាងសម្អាតជួរឈរបន្សុត។
អនុសាសន៍: អនុវត្តប្រតិបត្តិការ centrifugation បំពង់ទទេត្រឹមត្រូវតាមការណែនាំ។
5. ការបំពុលមិនបរិសុទ្ធផ្សេងទៀត។
ការវិភាគ៖ សំណាកដែលបានរក្សាទុក ឬសំណាកពិសេសមិនត្រូវបានព្យាបាលជាមុនទេ។
អនុសាសន៍៖ រៀបចំគំរូឱ្យបានហ្មត់ចត់តាមការណែនាំ។
