ពេលវេលាពិត PCR Easyᵀᴹ-Taqman
ការពិពណ៌នាកញ្ចប់៖
◮សាមញ្ញ—2× PCR Mix ដើម្បីកាត់បន្ថយការសាកល្បង និងពេលវេលាប្រតិបត្តិការ
◮ជាក់លាក់ - សតិបណ្ដោះអាសន្នដែលបានកែលម្អ និងអង់ស៊ីម Taq ចាប់ផ្តើមក្តៅអាចការពារការពង្រីកមិនជាក់លាក់ និងការបង្កើត primer dimer
◮ភាពប្រែប្រួលខ្ពស់ - អាចរកឃើញច្បាប់ចម្លងទាបនៃគំរូ
◮ភាពបត់បែនល្អ - ឆបគ្នាជាមួយឧបករណ៍ PCR បរិមាណតាមពេលវេលាជាក់ស្តែងបំផុត។
ការពិពណ៌នាអំពីកញ្ចប់
2X Real PCR ងាយស្រួលTMMix-Taqman ផ្តល់ដោយ Real Time PCR EasyTM-Taqman kit គឺជាប្រព័ន្ធ premix ថ្មីដែលប្រើ fluorescent probes ជាក់លាក់សម្រាប់ real time PCR amplification reactions ដែលអាចធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវភាពជាក់លាក់នៃផលិតផល និងប្រតិកម្មប្រតិកម្ម។ROX ត្រូវបានផ្តល់ជាថ្នាំជ្រលក់ខាងក្នុង។
2X ពិតប្រាកដ PCR ងាយស្រួលTMMix-Taqman មានផ្ទុកនូវ Taq DNA Polymerase ដ៏ពេញនិយមតែមួយគត់របស់ Foregene ។បើប្រៀបធៀបជាមួយនឹងអង់ស៊ីម Taq ធម្មតា វាមានគុណសម្បត្តិនៃប្រសិទ្ធភាព amplification ខ្ពស់ សមត្ថភាពពង្រីកជាក់លាក់ខ្លាំង និងអត្រាមិនស៊ីគ្នាទាប។វាអាចកាត់បន្ថយការពង្រីកមិនជាក់លាក់ និងធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវភាពត្រឹមត្រូវនៃ PCR ។
លក្ខណៈបច្ចេកទេស
| ពេលវេលាពិត PCR ងាយស្រួលTM- តាកម៉ាន់ | ||||
| សមាសភាពកញ្ចប់ (ប្រព័ន្ធ 20 μl) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
| 200T | 500T | 1000T | 2000T | |
| 2 ×PCR ពិតប្រាកដងាយស្រួលTMលាយ- តាកម៉ាន់ | 1 មីលីលីត្រ ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
| 20×ថ្នាំជ្រលក់យោង ROX | 200 μl | ០.៥ml | 1 មីលីលីត្រ | 1 មីលីលីត្រ × 2 |
| DNase-Free ddH2O | 1.7 មីលីលីត្រ | 1.7 ml ×2 | 10 មីលីលីត្រ | 20 មីលីលីត្រ |
| Iការបង្រៀន | 1 | 1 | 1 | ១ |
លក្ខណៈពិសេស & គុណសម្បត្តិ
■ សាមញ្ញ—2X PCR Mix ដើម្បីកាត់បន្ថយការសាកល្បង និងពេលវេលាប្រតិបត្តិការ
■ ជាក់លាក់ - សតិបណ្ដោះអាសន្នដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើង និងអង់ស៊ីម Taq ចាប់ផ្តើមក្តៅអាចការពារការពង្រីកមិនជាក់លាក់ និងការបង្កើត primer dimer
■ ភាពប្រែប្រួលខ្ពស់—អាចរកឃើញច្បាប់ចម្លងទាបនៃគំរូ
■ ភាពបត់បែនល្អ—ត្រូវគ្នាជាមួយឧបករណ៍ PCR បរិមាណតាមពេលវេលាជាក់ស្តែងបំផុត។
កម្មវិធីកញ្ចប់
ការវិភាគ qPCR
លំហូរការងារ
ក្រាហ្វិក
ការផ្ទុកនិងអាយុកាលធ្នើ
ឧបករណ៍នេះគួររក្សាទុកនៅឆ្ងាយពីពន្លឺ ហើយគួររក្សាទុកនៅ -20 ℃។ប្រសិនបើប្រើញឹកញាប់ វាក៏អាចរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 4 ℃ ក្នុងរយៈពេលខ្លី (10 ថ្ងៃ)។
មិនមានសញ្ញាពង្រីក
1.Taq DNA Polymerase នៅក្នុងឧបករណ៍បាត់បង់សកម្មភាពរបស់វា ដោយសារការផ្ទុកមិនត្រឹមត្រូវ ឬផុតកំណត់នៃកញ្ចប់។
អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់លក្ខខណ្ឌផ្ទុករបស់ឧបករណ៍;បន្ថែមបរិមាណសមស្របនៃ Taq DNA Polymerase ទៅប្រព័ន្ធ PCR ឬទិញឧបករណ៍ PCR ពេលវេលាពិតថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ពាក់ព័ន្ធ។
2. មានសារធាតុរារាំងជាច្រើននៃ Taq DNA Polymerase នៅក្នុងគំរូ DNA ។
ការណែនាំ៖ សម្អាតគំរូឡើងវិញ ឬកាត់បន្ថយចំនួនពុម្ពដែលបានប្រើ។
3. កំហាប់ Mg2+ មិនសមរម្យទេ។
អនុសាសន៍៖ កំហាប់ Mg2+ នៃ 2× Real PCR Mix ដែលយើងផ្តល់គឺ 3.5mM ។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ សម្រាប់ primers និងគំរូពិសេសមួយចំនួន កំហាប់ Mg2+ អាចខ្ពស់ជាង។ដូច្នេះ អ្នកអាចបន្ថែម MgCl2 ដោយផ្ទាល់ ដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពកំហាប់ Mg2+ ។វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យបង្កើន Mg2+ 0.5mM រាល់ពេលសម្រាប់ការបង្កើនប្រសិទ្ធភាព។
4. លក្ខខណ្ឌនៃការពង្រីក PCR គឺមិនសមស្របទេ ហើយលំដាប់បឋម ឬការប្រមូលផ្តុំគឺមិនត្រឹមត្រូវ។
ការណែនាំ៖ បញ្ជាក់ពីភាពត្រឹមត្រូវនៃលំដាប់ primer ហើយ primer មិនត្រូវបានបន្ទាបបន្ថោកទេ។ប្រសិនបើសញ្ញា amplification មិនល្អ សូមព្យាយាមបន្ថយសីតុណ្ហភាព annealing និងលៃតម្រូវកំហាប់ primer ឱ្យបានត្រឹមត្រូវ។
5. ចំនួននៃគំរូគឺតិចពេកឬច្រើនពេក។
អនុសាសន៍៖ អនុវត្តការបន្ថយជម្រាលលីនេអ៊ែរនៃគំរូ ហើយជ្រើសរើសការប្រមូលផ្តុំគំរូជាមួយនឹងឥទ្ធិពល PCR ដ៏ល្អបំផុតសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិត។
NTC មានតម្លៃ fluorescence ខ្ពស់ពេក
1.Reagent contamination បង្កឡើងកំឡុងពេលប្រតិបត្តិការ។
ការណែនាំ៖ ជំនួសដោយសារធាតុថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិត។
2.Contamination បានកើតឡើងកំឡុងពេលរៀបចំប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម PCR ។
ការណែនាំ៖ ចាត់វិធានការការពារចាំបាច់ក្នុងអំឡុងពេលប្រតិបត្តិការ ដូចជា៖ ពាក់ស្រោមដៃជ័រ ដោយប្រើចុងបំពង់ជាមួយតម្រង។ល។
3. primers ត្រូវបាន degraded ហើយការ degradation នៃ primers នឹងបណ្តាលឱ្យ amplification មិនជាក់លាក់។
ការណែនាំ៖ ប្រើ Electrophoresis SDS-PAGE ដើម្បីរកមើលថាតើ primers ត្រូវបានបន្ទាបបន្ថោកហើយជំនួសវាដោយ primers ថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិត។
primer dimer ឬ amplification មិនជាក់លាក់
1. កំហាប់ Mg2+ មិនសមរម្យទេ។
អនុសាសន៍៖ កំហាប់ Mg2+ នៃ 2 × Real PCR EasyTM Mix ដែលយើងផ្តល់គឺ 3.5 mM ។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ សម្រាប់ primers និងគំរូពិសេសមួយចំនួន កំហាប់ Mg2+ អាចខ្ពស់ជាង។ដូច្នេះ អ្នកអាចបន្ថែម MgCl2 ដោយផ្ទាល់ ដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពកំហាប់ Mg2+ ។វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យបង្កើន Mg2+ 0.5mM រាល់ពេលសម្រាប់ការបង្កើនប្រសិទ្ធភាព។
2.The PCR annealing temperature ទាបពេក។
ការណែនាំ៖ បង្កើនសីតុណ្ហភាព PCR annealing 1 ℃ ឬ 2 ℃ រាល់ពេល។
3. ផលិតផល PCR វែងពេក។
អនុសាសន៍៖ រយៈពេលនៃផលិតផល PCR ពេលវេលាពិតគួរតែមានចន្លោះពី 100-150bp មិនលើសពី 500bp ។
4.The primers ត្រូវបាន degraded ហើយការរិចរិលនៃ primers នឹងនាំឱ្យមានរូបរាងនៃ amplification ជាក់លាក់។
ការណែនាំ៖ ប្រើ Electrophoresis SDS-PAGE ដើម្បីរកមើលថាតើ primers ត្រូវបានបន្ទាបបន្ថោកហើយជំនួសវាដោយ primers ថ្មីសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិត។
5. ប្រព័ន្ធ PCR មិនត្រឹមត្រូវ ឬប្រព័ន្ធតូចពេក។
ការណែនាំ៖ ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម PCR តូចពេកនឹងធ្វើឱ្យភាពត្រឹមត្រូវនៃការរកឃើញថយចុះ។វាជាការល្អបំផុតក្នុងការប្រើប្រព័ន្ធប្រតិកម្មដែលបានណែនាំដោយឧបករណ៍ PCR បរិមាណ ដើម្បីដំណើរការការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិតឡើងវិញ។
ភាពអាចធ្វើឡើងវិញបានខ្សោយនៃតម្លៃបរិមាណ
1. ឧបករណ៍ដំណើរការខុសប្រក្រតី។
ការណែនាំ៖ វាអាចមានកំហុសរវាងរន្ធ PCR នីមួយៗនៃឧបករណ៍ ដែលបណ្តាលឱ្យមានការផលិតឡើងវិញមិនល្អក្នុងអំឡុងពេលគ្រប់គ្រងសីតុណ្ហភាព ឬការរកឃើញ។សូមពិនិត្យតាមការណែនាំរបស់ឧបករណ៍ដែលត្រូវគ្នា។
2. ភាពបរិសុទ្ធគំរូគឺមិនល្អទេ។
អនុសាសន៍៖ សំណាកដែលមិនបរិសុទ្ធនឹងនាំទៅរកភាពមិនអាចផលិតឡើងវិញនៃការពិសោធន៍ ដែលរួមមានភាពបរិសុទ្ធនៃគំរូ និង primers ។វាជាការល្អបំផុតក្នុងការបន្សុតគំរូឡើងវិញ ហើយ primers ត្រូវបានបន្សុតល្អបំផុតដោយ SDS-PAGE ។
3. ការរៀបចំប្រព័ន្ធ PCR និងពេលវេលាផ្ទុកគឺវែងពេក។
ការណែនាំ៖ ប្រើប្រព័ន្ធ PCR ពេលវេលាពិតសម្រាប់ការពិសោធន៍ PCR ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីការរៀបចំ ហើយកុំទុកវាចោលយូរពេក។
4. លក្ខខណ្ឌនៃការពង្រីក PCR គឺមិនសមស្របទេ ហើយលំដាប់បឋម ឬការប្រមូលផ្តុំគឺមិនត្រឹមត្រូវ។
ការណែនាំ៖ បញ្ជាក់ពីភាពត្រឹមត្រូវនៃលំដាប់ primer ហើយ primer មិនត្រូវបានបន្ទាបបន្ថោកទេ។ប្រសិនបើសញ្ញា amplification មិនល្អ សូមព្យាយាមបន្ថយសីតុណ្ហភាព annealing និងលៃតម្រូវកំហាប់ primer ឱ្យបានត្រឹមត្រូវ។
5. ប្រព័ន្ធ PCR មិនត្រឹមត្រូវ ឬប្រព័ន្ធតូចពេក។
ការណែនាំ៖ ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម PCR តូចពេកនឹងធ្វើឱ្យភាពត្រឹមត្រូវនៃការរកឃើញថយចុះ។វាជាការល្អបំផុតក្នុងការប្រើប្រព័ន្ធប្រតិកម្មដែលបានណែនាំដោយឧបករណ៍ PCR បរិមាណ ដើម្បីដំណើរការការពិសោធន៍ PCR ពេលវេលាពិតឡើងវិញ។
