(96-well) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Green I
ការពិពណ៌នា
នេះ។(៩៦-ល្អ) QuickEasyTM កញ្ចប់ Cell Direct RT-qPCR–SYBR Green Iផ្តល់ប្រព័ន្ធសតិបណ្ដោះអាសន្ន លីហ្សីស តែមួយគត់to បញ្ចេញ RNA យ៉ាងឆាប់រហ័សពីកោសិកាវប្បធម៌សំណាកគំរូសម្រាប់ប្រតិកម្ម RT-qPCR បំបាត់ការចំណាយពេល និងហត់នឿយដំណើរការបន្សុត RNA ហើយចំណាយពេលត្រឹមតែ 7 នាទីប៉ុណ្ណោះដើម្បីទទួលបានគំរូ RNA ដែលត្រូវការ។នេះ។5 × ល្បាយ RT ផ្ទាល់និង2 × ផ្ទាល់ qPCR Mix-SYBRផ្ដល់ជូនក្នុងប្រអប់អាចលឿន និងរហ័សទទួលបានបរិមាណតាមពេលវេលាជាក់ស្តែងលទ្ធផល PCR ។
5× Direct RT Mix និង 2× Direct qPCR Mix-SYBR មានភាពអត់ធ្មត់ក្នុងការទប់ស្កាត់ខ្លាំង ហើយអាចប្រើ lysate នៃគំរូដែលត្រូវបានសាកល្បងជាគំរូសម្រាប់ការចម្លងបញ្ច្រាសប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព និងការពង្រីកជាក់លាក់។សារធាតុនេះមានផ្ទុកនូវសារធាតុ Reverse Transcriptase តែមួយគត់របស់ Foregene ដែលមានទំនាក់ទំនងខ្ពស់សម្រាប់ RNA ក៏ដូចជា Hot D-Taq DNA Polymerase , dNTPs, MgCl2 , សតិបណ្ដោះអាសន្នប្រតិកម្ម , PCR optimizer and stabilizer , និងអាចត្រូវបានប្រើរួមគ្នាជាមួយ lysis buffer ដើម្បីរកឃើញគំរូយ៉ាងឆាប់រហ័ស ងាយស្រួល និងត្រឹមត្រូវ ហើយវាមានលក្ខណៈនៃភាពប្រែប្រួលខ្ពស់ ជាក់លាក់ខ្លាំង និងស្ថេរភាពល្អ។
កញ្ចប់នេះមានគោលបំណងទៅលើប្រព័ន្ធមីក្រូលីសនៃកោសិកាវប្បធម៌ 96 អណ្តូង ហើយមានភាពស៊ីសង្វាក់គ្នា និងស៊ីសង្វាក់គ្នាល្អ។សមាសធាតុនៃកញ្ចប់ផ្តល់នូវប្រតិកម្ម 96 លីហ្សី 96 ប្រតិកម្មចម្លងបញ្ច្រាស និងប្រតិកម្ម 96 × 2 qPCR ដែលអាចបំពេញចានកោសិកា 96 អណ្តូងសម្រាប់ប្រើប្រាស់តែម្តង ជៀសវាងការបំពុលដែលបណ្តាលមកពីការបើកម្តងហើយម្តងទៀត ត្រជាក់ និងការរលាយនៃសារធាតុ និងការរិចរិលនៃដំណើរការរបស់ reagent ។
សមាសធាតុនៃកញ្ចប់
| សមាសភាពកញ្ចប់ ( 50 μប្រព័ន្ធលីលីស / ២0 μLRT ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម / ២០μប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម L qPCR) | DRT-03០១១ | ចំណាំ | |
| 96T | |||
| ផ្នែកI | សតិបណ្ដោះអាសន្នCL | 5 មីលីលីត្រ | ក្រឡាលីស |
| បុព្វបុរសProtease Plus II | ១០០ μL | ||
| សតិបណ្ដោះអាសន្នST | ៥០០ μL | ||
| ផ្នែក II | ឌីអិនអេជ័រលុប | ១០០ μL | |
| 5 × ល្បាយ RT ផ្ទាល់ | ៤០០ μL | RT | |
| 2 × ល្បាយ qPCR ផ្ទាល់-SYBR | 1 មL × ២ | qPCR | |
| 50 × ROX Reference Dye | 400µL | ||
| RNase- ឥតគិតថ្លៃddH2 O | 1.7 មីលីលីត្រ |
| |
| Mប្រចាំឆ្នាំ | 1 ដុំ | 1 ការបម្រើ | |
*: ជ័រលុប DNA reagent ត្រូវបានរួមបញ្ចូលនៅក្នុងផ្នែកទី II នៃកញ្ចប់។សមាសធាតុកោសិកា Lysis, RT, និង qPCR អាចត្រូវបានទិញដោយឡែកពីគ្នា។
លក្ខណៈពិសេស & គុណសម្បត្តិ
■សាមញ្ញ និងមានប្រសិទ្ធភាព៖ ជាមួយនឹងបច្ចេកវិទ្យា Cell Direct RT គំរូ RNA អាចទទួលបានក្នុងរយៈពេលត្រឹមតែ 7 នាទីប៉ុណ្ណោះ។
■ តំរូវការគំរូគឺតូច ដែលអាចសាកល្បងបាន 10 កោសិកា។
■ ការបញ្ជូនថាមពលខ្ពស់៖ វាអាចរកឃើញ RNA យ៉ាងឆាប់រហ័សនៅក្នុងកោសិកាដែលត្រូវបានដាំដុះក្នុង 384, 96, 24, 12, 6-well plates ។
■ DNA Eraser អាចលុបហ្សែនដែលបានចេញផ្សាយយ៉ាងឆាប់រហ័ស កាត់បន្ថយផលប៉ះពាល់យ៉ាងខ្លាំងទៅលើលទ្ធផលពិសោធន៍ជាបន្តបន្ទាប់។
■ ប្រព័ន្ធ RT និង qPCR ដែលត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងធ្វើឱ្យការចម្លងបញ្ច្រាស RT-PCR ពីរជំហានកាន់តែមានប្រសិទ្ធភាព និង PCR កាន់តែជាក់លាក់ និងធន់នឹងថ្នាំទប់ស្កាត់ប្រតិកម្ម RT-qPCR ។
កម្មវិធីកញ្ចប់
វិសាលភាពនៃការអនុវត្ត៖ កោសិកាដាំដុះ។
- RNA បញ្ចេញដោយ លីហ្សីសគំរូ៖ អាចអនុវត្តបានតែចំពោះគំរូ RT-qPCR នៃឧបករណ៍នេះប៉ុណ្ណោះ។
- ឧបករណ៍នេះអាចត្រូវបានប្រើសម្រាប់គោលបំណងដូចខាងក្រោមៈ ការវិភាគការបញ្ចេញហ្សែន ការផ្ទៀងផ្ទាត់ប្រសិទ្ធភាពនៃការបំបិទហ្សែនដែលសម្របសម្រួលដោយ siRNA ការពិនិត្យថ្នាំ។ល។
ការផ្ទុកនិងអាយុកាលធ្នើ
ផ្នែកទី 1 នៃកញ្ចប់នេះគួរតែត្រូវបានរក្សាទុកនៅ 4℃;ផ្នែកទី II គួរតែត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -20 ℃។
Foregene Protease Plus II គួរតែត្រូវបានរក្សាទុកនៅ 4℃, មិនបង្កកនៅ -20 ℃។
សារធាតុ Reagent ២×qPCR Mix-Taqman ដោយផ្ទាល់គួរតែត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -20℃នៅក្នុងទីងងឹត;ប្រសិនបើប្រើញឹកញាប់ វាក៏អាចរក្សាទុកនៅលេខ 4 ផងដែរ។℃សម្រាប់ការផ្ទុករយៈពេលខ្លី (ប្រើឡើងក្នុងរយៈពេល 10 ថ្ងៃ) ។
គោលការណ៍នៃការរចនាបឋម PCR ពេលវេលាពិត
Primer ទៅមុខ និង បញ្ច្រាស primer
សម្រាប់ PCR ពេលវេលាពិត ការរចនាបឋមមានសារៈសំខាន់ណាស់។Primers ត្រូវបានទាក់ទងទៅនឹងភាពជាក់លាក់ និងប្រសិទ្ធភាពនៃការពង្រីក PCR ហើយអាចត្រូវបានរចនាដោយយោងទៅលើគោលការណ៍ដូចខាងក្រោមៈ
- ប្រវែង primer: 18-30bp ។
- មាតិកា GC: 40-60% ។
- តម្លៃ Tm៖ កម្មវិធីរចនាបឋម ដូចជា Primer 5 អាចផ្តល់តម្លៃ Tm នៃ primer ។តម្លៃ Tm នៃ primers ខាងលើ និងខាងក្រោមគួរតែនៅជិតបំផុតតាមដែលអាចធ្វើទៅបាន។រូបមន្តគណនា Tm ក៏អាចប្រើបានដែរ៖ Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T) ។នៅពេលអនុវត្ត PCR សីតុណ្ហភាពក្រោមតម្លៃ primer Tm នៃ 5 ° C ជាទូទៅត្រូវបានជ្រើសរើសជាសីតុណ្ហភាព annealing (ការកើនឡើងដែលត្រូវគ្នានៃសីតុណ្ហភាព annealing អាចបង្កើនភាពជាក់លាក់នៃប្រតិកម្ម PCR) ។
- ថ្នាំ primers និង PCR ផលិតផល៖
- ប្រវែងផលិតផលពង្រីក PCR primer គឺល្អជាង 100-150bp ។
- ការរចនា primers នៅក្នុងតំបន់រចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំនៃគំរូគួរតែត្រូវបានជៀសវាងឱ្យបានច្រើនតាមដែលអាចធ្វើទៅបាន។
- ជៀសវាងការបង្កើតមូលដ្ឋានបំពេញបន្ថែម 2 ឬច្រើនរវាងចុង 3′ នៃ primers ខាងលើ និងខាងក្រោម។
- មូលដ្ឋានស្ថានីយ Primer 3′ មិនអាចមានវត្តមានជាមួយ G ឬ C ជាប់គ្នា 3 បន្ថែមទេ។
- ថ្នាំ primers ខ្លួនឯងមិនអាចមានរចនាសម្ព័ន្ធបំពេញបន្ថែមទេបើមិនដូច្នេះទេរចនាសម្ព័ន្ធសក់នឹងត្រូវបានបង្កើតឡើងដែលប៉ះពាល់ដល់ការពង្រីក PCR ។
- ATCG គួរតែត្រូវបានចែកចាយស្មើៗគ្នាតាមដែលអាចធ្វើទៅបាននៅក្នុងលំដាប់បឋម ហើយមូលដ្ឋានស្ថានីយ 3′ គួរតែត្រូវបានជៀសវាងដូចជា T.
ឧបសម្ព័ន្ធ១៖ គដោយផ្ទាល់RT-qPCR សំណុំសមាសធាតុt កញ្ចប់បន្ថែម
1.Cell Lysis Solution
| ដំណោះស្រាយកោសិកាលីស | |||
| សមាសធាតុនៃកញ្ចប់ (ប្រព័ន្ធលីលីស ២៤-អណ្តូង) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ធ | 500 ធ | ||
| ផ្នែកI | Buffer CL | 20 មីលីលីត្រ | 100 មីលីលីត្រ |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 មីលីលីត្រ × 2 | |
| Buffer ST | 1 មីលីលីត្រ × 2 | 10 មីលីលីត្រ | |
| ផ្នែកII | ជ័រលុប DNA | 400 μl | 1 មីលីលីត្រ × 2 |
| RT លាយ | |
| សមាសធាតុនៃកញ្ចប់ (ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| ២០០ ធ | |
| 5 × ល្បាយ RT ផ្ទាល់ | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7ml × 2 |
| qPCR លាយ | ||
| សមាសធាតុនៃកញ្ចប់ (ប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| ២០០ ធ | 1000 ធ | |
| 2 × ផ្ទាល់ qPCR Mix-Taqman | 1 មីលីលីត្រ × 2 | 1.7ml × 6 |
| 20 × ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 មីលីលីត្រ | 10 មីលីលីត្រ |
សៀវភៅណែនាំ៖
