RNase គឺជា​ពាក្យ​រសើប​ដែល​សិស្ស​ជាច្រើន​ដែល​ឧស្សាហ៍​ធ្វើ​ការ​ពិសោធន៍​ទាញយក RNA មិនចង់​ឮ។ប្រដាប់អាវុធយ៉ាងពេញលេញ RNA ដែលត្រូវបានចម្រាញ់ចេញជាមួយនឹងសារធាតុពុលខ្ពស់ phenol និង chloroform ត្រូវបានបំផ្លាញចោល។ខ្ញុំ​មិន​ត្រូវ​គ្នា​ទេ!!!ថ្ងៃនេះសូមក្រឡេកមើលប្រភពដើមនៃ Rnase ដ៏ល្បីល្បាញ។

Ribonuclease (RNase) ឬ RNase គឺជា nuclease ដែលអាច hydrolyze RNA ទៅជាម៉ូលេគុលតូចៗ។RNase ជាប្រូតេអ៊ីនម៉ូលេគុលតូចមួយមានស្ថេរភាពខុសពីធម្មតា។ .សីតុណ្ហភាពខ្ពស់ធម្មតា និងសម្ពាធខ្ពស់ ការក្រៀវដោយចំហាយទឹក និងថ្នាំទប់ស្កាត់ប្រូតេអ៊ីនមិនអាចអសកម្មវាទាំងស្រុងបានទេ។ស្ថេរភាពនៃ RNase ភាគច្រើនបានមកពីចំណង disulfide នៅក្នុងរចនាសម្ព័ន្ធ។ឧទាហរណ៍ RNase ដែលប្រើជាទូទៅនៃលំពែង bovine មានអាស៊ីតអាមីណូចំនួន 124 ប៉ុន្តែមានចំណង disulfide 4 ។ចំណងស្ពាន់ធ័រ និងចំណង disulfide ផ្តល់ RNase ជាមួយនឹងស្ថេរភាពកម្ដៅដ៏ល្អ។លើសពីនេះទៀត rnase មានទម្ងន់ម៉ូលេគុលតិចតួច ហើយអាចស្ដារឡើងវិញនូវទម្រង់ដើមរបស់វាបានយ៉ាងឆាប់រហ័សក្នុងករណីជាច្រើន។

បន្ថែមពីលើស្ថេរភាពខ្លាំង។RNases មានគ្រប់ទីកន្លែងនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ .RNase គឺជាយន្តការការពារជីវសាស្ត្រ។សម្រាប់កោសិកាមួយ RNA exogenous ច្រើនតែស្លាប់។បើប្រៀបធៀបជាមួយ DNA ខាងក្រៅ RNA ខាងក្រៅច្រើនតែមានគ្រោះថ្នាក់ជាង។RNA ត្រូវបានចម្លង និងបកប្រែដោយរីករាយ ដូច្នេះសារពាង្គកាយស្ទើរតែទាំងអស់បានវិវត្តន៍ RNases ដើម្បីការពារប្រឆាំងនឹងការឈ្លានពាននៃ RNA ខាងក្រៅ។ដូច្នេះ កោសិកាបាក់តេរីដែលដាំដុះនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ និងអ្នកដែលទាញយក RNA បញ្ចេញក្លិនក្រអូបរបស់ RNase ។សារធាតុរាវក្នុងខ្លួនរបស់មនុស្ស (ទឹកមាត់ ទឹកភ្នែក។កាន់តែយំ ការថយចុះ RNA កាន់តែអាក្រក់!!បងស្រី Daiyu មិនស័ក្តិសមសម្រាប់ការទាញយក RNA ទេ!

លើសពីនេះ ស្បែកដ៏ឆ្ងាញ់របស់អ្នកក៏មានផ្ទុកសារធាតុ RNase ជាច្រើនផងដែរ ហើយស្លាកសញ្ញា បំពង់ទឹក ទ្វារទូទឹកកក និងចំណុចទាញទ្វារដែលត្រូវបានប៉ះដោយស្បែកក៏មានផ្ទុកសារធាតុ RNase ផងដែរ។

ជាមួយនឹងការច្របូកច្របល់ច្រើន សូមក្រឡេកមើលរបៀបដោះស្រាយជាមួយ RNases ។

រឿងដំបូងដែលមនុស្សគ្រប់គ្នាគិតនៅពេលដក RNA គឺDEPC(ឌីអេទីល pyrocarbonate) ។DEPC កំណត់ប្រូតេអ៊ីនជាចម្បងដោយការរួមបញ្ចូលគ្នាជាមួយ imidazole ring នៃក្រុមសកម្ម RNase histidine ដោយហេតុនេះរារាំងសកម្មភាពរបស់អង់ស៊ីម។0.1% DEPC អាចមានឥទ្ធិពលដកយកចេញបានល្អជាងនៅលើ Rnase ប៉ុន្តែយើងត្រូវយកចិត្តទុកដាក់ថា DEPC គឺជាសារធាតុបង្កមហារីកដែលគេស្គាល់ ដូច្នេះការយកចិត្តទុកដាក់ជាពិសេសគួរតែត្រូវបានបង់នៅពេលប្រើវា។

សម្រាប់ RNase យើងត្រូវចាប់ផ្តើមពីទិដ្ឋភាពពីរគឺទីមួយគឺរារាំងសកម្មភាពរបស់ RNase endogenous

សារធាតុចម្រាញ់ចេញពី RNA ធម្មតាដូចជា guanidine isothiocyanate និង DTT ដែលមាននៅក្នុង Trizol អាចបើកចំណង disulfide នៃ RNase ប៉ុន្តែនៅតែមាន RNases មួយចំនួន ជាពិសេសនៅក្នុងគំរូជាលិកា ដូច្នេះត្រូវយកចិត្តទុកដាក់លើសីតុណ្ហភាពទាប។

១.ជ្រមុជភ្លាមៗនូវគំរូជាលិកានៅក្នុងអាសូតរាវ បន្ទាប់ពីយកវាចេញ ឬក្នុងដំណោះស្រាយអភិរក្ស RNA ពាណិជ្ជកម្ម។

២.បន្ទាប់ពីទាញយក RNA នៃគំរូកោសិការួច បន្ថែមវាទៅក្នុងដំណោះស្រាយលីហ្សីស ហើយលីសនៅលើប្រអប់ទឹកកក

3. វាជាការល្អបំផុតក្នុងការប្រើអាសូតរាវសម្រាប់កិន នៅពេលដែលគំរូជាលិកាមានភាពដូចគ្នា។នៅពេលប្រើម៉ាស៊ីនអេឡិចត្រិចដែលមិនមានអាសូតរាវ សូមយកចិត្តទុកដាក់ចំពោះការធ្វើឱ្យអាដាប់ទ័រ homogenate ត្រជាក់ជាមុនទាំងស្រុង។

ទីពីរគឺ DNase ខាងក្រៅ

១.ត្រូវប្រដាប់ដោយអាវុធពេញលេញ ពាក់អាវក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ ពាក់ម៉ាស ហើយត្រូវពាក់ស្រោមដៃថ្មី (កុំសន្សំសំចៃពេក!! គួរកត់សំគាល់ថា Trizol មានភាពច្រេះខ្លាំង ហើយវាក៏ខ្លាំងតាមរយៈស្រោមដៃផងដែរ ដូច្នេះកុំឱ្យស្រក់លើដៃរបស់អ្នក)។

២.រាល់គន្លឹះបំពង់ដែលប្រើរួច បំពង់ EP បំពង់ PCR និងឧបករណ៍ផ្សេងទៀតត្រូវតែត្រូវបានព្យាបាលដោយ de-RNase ។វាអាចត្រូវបានត្រាំក្នុង 0.1% DEPC ហើយបន្ទាប់មកដាក់សម្ពាធក្រោមសម្ពាធខ្ពស់។យកចិត្តទុកដាក់ចំពោះប្រតិបត្តិការនៅក្នុងបំពង់ផ្សែង។ឧកញ៉ាក្នុងស្រុកអាចទិញដោយផ្ទាល់នូវសម្ភារៈប្រើប្រាស់សម្រាប់ដកអង់ស៊ីម។

PS: ខ្ញុំ​សូម​ប្រាប់​អ្នក​ពី​វិធី​សា​ស្រ្ត​ខ្ជិល​។ទោះបីជាសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ និងសម្ពាធខ្ពស់មិនអាចដក RNase ចេញបានទាំងស្រុងក៏ដោយ វានឹងដកផ្នែកធំរបស់វាចេញ។2 ដងនៃសីតុណ្ហភាពខ្ពស់និងសម្ពាធខ្ពស់មានឥទ្ធិពលល្អហើយការទាញយក RNA មានប្រសិទ្ធភាពតិចតួច។

៣.ជាតិអាល់កុលអាចបំបែកប្រូតេអ៊ីន,ដូច្នេះតារាងទាញយក RNA អាចត្រូវបានលុបចោលជាមួយនឹងជាតិអាល់កុល 75% ហើយស្រោមដៃក៏អាចបាញ់ជាមួយអាល់កុលបានដែរ។

៤.ដំណោះស្រាយរំលាយ RNA ចុងក្រោយ និងបំពង់ centrifuge គួរតែត្រូវបានព្យាបាលដោយ de-RNase ផងដែរ។ទឹក DEPC គឺជាដំណោះស្រាយរំលាយ RNA ដែលប្រើជាទូទៅ។ចូរនិយាយអំពីវិធីសាស្រ្តនៃការរៀបចំត្រឹមត្រូវនៃទឹក DEPC (ចងចាំថាត្រូវវេចខ្ចប់ឡើងវិញនូវ DEPC ពាណិជ្ជកម្មនៅពេលអ្នកទិញវា)

បន្ថែម DEPC ទៅក្នុងទឹកសុទ្ធនៅសីតុណ្ហភាព 1:1000 អ្រងួនល្អ ទុកមួយយប់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C និងក្រៀវនៅសីតុណ្ហភាព 121°C ក្រោមសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ និងសម្ពាធខ្ពស់រយៈពេល 15 នាទី។ទឹក DEPC អាចត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -20 ° C ក្នុង 1ml aliquots ។

ជាចុងក្រោយ សរុបមក៖ សីតុណ្ហភាពទាបគឺជាគន្លឹះ សម្ភារៈប្រើប្រាស់ត្រូវបានគ្រប់គ្រងបានល្អ ប្រដាប់អាវុធពេញលេញ និងនិយាយតិច!

នោះហើយជាវាសម្រាប់យុទ្ធសាស្ត្រថ្ងៃនេះ។ខ្ញុំសូមជូនពរអ្នកនូវការប្រមូលផ្តុំ RNA និងភាពបរិសុទ្ធដែលអ្នកបានលើកឡើង។ទាំងពីរ A260/A280 គឺ 2.0!!!

ជាការពិតណាស់ប្រសិនបើអ្នកប្រើ aឧបករណ៍ទាញយក RNA ប្រតិបត្តិការសីតុណ្ហភាពបន្ទប់អ្នកប្រហែលជាមិនជួបប្រទះបញ្ហាខាងលើទេ។

ប្រតិបត្តិការនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ ដោយមិនបន្ថែម DNase ទាញយក RNA សរុបចេញពីកោសិកាក្នុងរយៈពេល 11 នាទី ហើយទាញយក RNA សរុបចេញពីជាលិកាសត្វ ឬរុក្ខជាតិក្នុងរយៈពេល 30 នាទី។

សម្រាប់គំរូសាកល្បង សូមទាក់ទង៖overseas@foregene.com

ផលិតផលដែលពាក់ព័ន្ធ៖

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/