តើអ្វីទៅជាវ៉ាក់សាំង mRNA
វ៉ាក់សាំង mRNA ផ្ទេរ RNA ទៅកោសិកានៃរាងកាយដើម្បីបង្ហាញ និងផលិតអង់ទីហ្សែនប្រូតេអ៊ីន បន្ទាប់ពីការកែប្រែដែលពាក់ព័ន្ធនៅក្នុង vitro ដោយហេតុនេះនាំឱ្យរាងកាយផលិតការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំប្រឆាំងនឹងអង់ទីហ្សែន ដោយហេតុនេះពង្រីកសមត្ថភាពភាពស៊ាំរបស់រាងកាយ។[1,3].
រូបភាពទី 1: ដ្យាក្រាមគ្រោងការណ៍នៃឥទ្ធិពលនៃការចាក់វ៉ាក់សាំង mRNA ដោយផ្ទាល់ [2]
ចំណាត់ថ្នាក់នៃវ៉ាក់សាំង mRNA
វ៉ាក់សាំង mRNA ចែកចេញជាពីរប្រភេទ៖មិនចម្លងmRNA និងការពង្រីកខ្លួនឯងmRNA៖ ការពង្រីកដោយខ្លួនឯង mRNA មិនត្រឹមតែបំប្លែងអង់ទីហ្សែនគោលដៅប៉ុណ្ណោះទេ ថែមទាំងបញ្ចូលកូដចម្លងដែលអនុញ្ញាតឱ្យពង្រីក RNA ខាងក្នុងកោសិកា និងយន្តការបញ្ចេញប្រូតេអ៊ីន។វ៉ាក់សាំង mRNA ដែលមិនចម្លងបានតែអ៊ិនកូដអង់ទីហ្សែនគោលដៅ និងមានតំបន់ 5' និង 3' ដែលមិនបកប្រែ (UTR) ។ពួកវាផ្តល់នូវការរំញោចដ៏ទូលំទូលាយនៃការសម្របខ្លួន និងភាពស៊ាំពីខាងក្នុង ពោលគឺនៅក្នុងកន្សោម antigen ទីតាំង និងការបញ្ជូនសញ្ញាគ្រោះថ្នាក់ និងមានកម្មវិធីដូចខាងក្រោម[2,3]
●អាចផ្តល់នូវការរំញោចដ៏ទូលំទូលាយនៃការសម្របខ្លួន និងភាពស៊ាំពីខាងក្នុង ពោលគឺនៅក្នុងកន្សោម antigen ទីតាំង និងការបញ្ជូនសញ្ញាគ្រោះថ្នាក់
●អាចជំរុញឱ្យមានការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ "មានតុល្យភាព" រួមទាំងឥទ្ធិពលកំប្លែង និងកោសិកា និងការចងចាំនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ
●អាចផ្សំអង់ទីហ្សែនផ្សេងៗគ្នាដោយមិនបង្កើនភាពស្មុគស្មាញនៃការបង្កើតវ៉ាក់សាំង
●ការធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងជាបន្តបន្ទាប់នៃសក្តានុពលនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំអាចសម្រេចបានតាមរយៈការចាក់វ៉ាក់សាំងម្តងហើយម្តងទៀត ហើយមិនមានការឆ្លើយតបនឹងប្រព័ន្ធភាពស៊ាំតិចតួចចំពោះអ្នកផ្តល់សេវានោះទេ។
● វ៉ាក់សាំង mRNA មានស្ថេរភាពអាចសម្រួលដល់ការដឹកជញ្ជូន និងការរក្សាទុកវ៉ាក់សាំង
រូបភាពទី 2៖ ដ្យាក្រាមគ្រោងការណ៍នៃវ៉ាក់សាំង mRNA និងយន្តការបញ្ចេញអង់ទីហ្សែនរបស់វា [4]
លក្ខណៈពិសេសនៃវ៉ាក់សាំង mRNA
បើប្រៀបធៀបជាមួយនឹងវ៉ាក់សាំងប្រពៃណី វ៉ាក់សាំង mRNA មានដំណើរការផលិតសាមញ្ញ ល្បឿននៃការអភិវឌ្ឍន៍លឿន មិនត្រូវការវប្បធម៌កោសិកា និងតម្លៃទាប។បើប្រៀបធៀបជាមួយនឹងវ៉ាក់សាំង DNA វ៉ាក់សាំង mRNA មិនចាំបាច់ចូលទៅក្នុងស្នូលទេ ហើយក៏គ្មានហានិភ័យនៃការរួមបញ្ចូលទៅក្នុងហ្សែនមេដែរ។ពាក់កណ្តាលជីវិតអាចត្រូវបានកែតម្រូវដោយការកែប្រែ។
តារាងទី 1: គុណសម្បត្តិ និងគុណវិបត្តិនៃវ៉ាក់សាំង mRNA
|
| អត្ថប្រយោជន៍ | កង្វះខាត |
| វ៉ាក់សាំង mRNA | ការស្រាវជ្រាវ និងការអភិវឌ្ឍន៍យ៉ាងឆាប់រហ័ស ការផលិតវ៉ាក់សាំងត្រូវចំណាយពេលត្រឹមតែ 40 ថ្ងៃប៉ុណ្ណោះ។ | បង្កឱ្យមានការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំដែលមិនចាំបាច់
|
| អស្ថិរភាព mRNA នៅក្រោមលក្ខខណ្ឌសរីរវិទ្យា ងាយស្រួលក្នុងការបន្ទាបបន្ថោក | នឹងមិនបញ្ចូលទៅក្នុងហ្សែនដើម្បីជៀសវាងការផ្លាស់ប្តូរការព្យាបាលដែលអាចកើតមាន
| |
| មិនចាំបាច់មានសញ្ញាធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្មនុយក្លេអ៊ែរណាមួយទេ ប្រតិចារិក | ប្រសិទ្ធភាពនៃនុយក្លេអ៊ែរសុវត្ថិភាពនៅតែត្រូវបានផ្ទៀងផ្ទាត់
|
រូបភាពទី 3៖ តារាងលំហូរនៃការផលិត និងការរៀបចំវ៉ាក់សាំង mRNA [4]
ឧបករណ៍ញែកមេរោគ Foregene Viral RNA
RT-qPCR ងាយស្រួល (ជំហានមួយ)
យុទ្ធសាស្រ្តធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងសម្រាប់ការរៀបចំវ៉ាក់សាំង mRNA
ដោយសារតែស្ថេរភាពមិនល្អនៃ mRNA ខ្លួនវា ការរិចរិលយ៉ាងងាយស្រួលដោយនុយក្លេអ៊ែរនៅក្នុងជាលិកា ប្រសិទ្ធភាពនៃការបញ្ចូលកោសិកាទាប និងប្រសិទ្ធភាពនៃការបកប្រែទាប ពិការភាពទាំងនេះកំណត់ការអនុវត្តន៍វ៉ាក់សាំង mRNA ។ប្រសិទ្ធភាពនៃការបកប្រែក៏ដើរតួយ៉ាងសំខាន់ផងដែរ។យានដឹកជញ្ជូនអាចបែងចែកជាវ៉ិចទ័រមេរោគ និងវ៉ិចទ័រដែលមិនមែនជាមេរោគ (រួមទាំង លីប៉ូសូម មិនមែនលីប៉ូសូម មេរោគ ណាណូ ជាដើម)។ដូច្នេះ វិធានការកែលម្អដែលពាក់ព័ន្ធគឺចាំបាច់។ខាងក្រោមនេះគឺជាយុទ្ធសាស្ត្រកែលម្អឱសថសាស្ត្រសម្រាប់ការរៀបចំ mRNA[2]
1 សំយោគ cap analogs ឬប្រើអង់ស៊ីម capping ដើម្បីធ្វើឱ្យ mRNA ស្ថេរភាព និងបង្កើនការបកប្រែប្រូតេអ៊ីនដោយភ្ជាប់ទៅនឹងកត្តាចាប់ផ្តើមបកប្រែ eukaryotic 4E (EIF4E)
2 កែសម្រួលធាតុនៅក្នុងតំបន់ 5′-untranslated (UTR) និង 3′-UTR ដើម្បីធ្វើឱ្យ mRNA ស្ថេរភាព និងបង្កើនការបកប្រែប្រូតេអ៊ីន
3 ការបន្ថែមកន្ទុយ Poly(A) អាចធ្វើឱ្យ mRNA មានស្ថេរភាព និងបង្កើនការបកប្រែប្រូតេអ៊ីន
4 កែប្រែ nucleosides ដើម្បីកាត់បន្ថយសកម្មភាពនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំពីខាងក្នុង និងបង្កើនការបកប្រែ
5 ការព្យាបាលជាមួយនឹង RNase III និងការបន្សុតប្រូតេអ៊ីនរាវ chromatography (FPLC) លឿនអាចកាត់បន្ថយសកម្មភាពនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ និងបង្កើនការបកប្រែ
6 បង្កើនប្រសិទ្ធភាពលំដាប់ ឬ codons ដើម្បីបង្កើនការបកប្រែ
7 ការសហការផ្តល់កត្តាចាប់ផ្តើមការបកប្រែ និងវិធីសាស្រ្តផ្សេងទៀតដើម្បីផ្លាស់ប្តូរការបកប្រែ និងភាពស៊ាំ
រូបភាពទី 4៖ ប្រតិចារិកក្នុង vitro (IVT) mRNA ដំណើរការផលិត និងការផ្គុំ [5]
ការរៀបចំទ្រង់ទ្រាយធំនៃ plasmid DNA
ការបន្សុត DNA របស់ Plasmid ភាគច្រើនយកសារធាតុកខ្វក់ដូចជា RNA, Open-circle DNA endotoxin, host protein និង host nucleic acid ហើយជាធម្មតាបំលែង plasmid recombinant ទៅជា E. coli។E. coli ឆ្លងកាត់ការ fermentation ដង់ស៊ីតេខ្ពស់ បន្ទាប់មកការបំបែកអង្គធាតុរាវ និងការប្រមូលផ្តុំនៃ E. coli ។បន្ទាប់មក E. coli ត្រូវបានទទួលរងនូវ lysis អាល់កាឡាំង ការបំបែកអង្គធាតុរាវ centrifugal និង ការបំភ្លឺមីក្រូហ្វីលបន្ទាប់ពី lysis, ultrafiltration និងការផ្តោតអារម្មណ៍បន្ទាប់ពីការបញ្ជាក់ ហើយបន្ទាប់មកការបន្សុត chromatographic ។
ការបន្សុតនៃ plasmid DNA៖
Foregene General Plasmid Mini Kit
【១【苗鹤凡, 郭勇, 江新香.mRNA疫苗研究进展及挑战[J] ។免疫学杂志, 2016(05):446-449។
【២】Pardi N, Hogan MJ, Porter FW, et al ។វ៉ាក់សាំង mRNA - យុគសម័យថ្មីនៃវ៉ាក់សាំង[J]។ធម្មជាតិពិនិត្យការរកឃើញគ្រឿងញៀន ឆ្នាំ 2018 ។
【៣】Kramps T., Elbers K. (2017) ការណែនាំអំពីវ៉ាក់សាំង RNA ។នៅក្នុង: Kramps T., Elbers K. (eds) វ៉ាក់សាំង RNA ។Methods in Molecular Biology, vol 1499. Humana Press, New York, NY ។
【៤】Maruggi G, Zhang C, Li J, et al ។mRNA ជាបច្ចេកវិទ្យាបំប្លែងសម្រាប់ការអភិវឌ្ឍន៍វ៉ាក់សាំងដើម្បីគ្រប់គ្រងជំងឺឆ្លង[J]។ការព្យាបាលដោយម៉ូលេគុលឆ្នាំ 2019 ។
【5】Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix, កាត់ដេរ mRNA Vaccine ដើម្បីឱ្យមានតុល្យភាពនៃការឆ្លើយតបភាពស៊ាំពីកំណើត/សម្របខ្លួន, និន្នាការក្នុងថ្នាំម៉ូលេគុល, ភាគ 26, លេខ 3,2020, ទំព័រ 311-323។
ពេលវេលាផ្សាយ៖ សីហា-០៥-២០២១
