ប្រតិចារិកបញ្ច្រាសបែបប្រពៃណីមិនអាចទ្រាំនឹងសីតុណ្ហភាពខ្ពស់បានទេ (សីតុណ្ហភាពល្អបំផុតសម្រាប់សកម្មភាព MMLV គឺ 37-50°C និង AMV គឺ 42-60°C)។RNA មេរោគ​ដែល​ស្មុគស្មាញ​ជាង​នេះ​មិន​អាច​ត្រូវ​បាន​ចម្លង​យ៉ាង​មាន​ប្រសិទ្ធភាព​ទៅ​ក្នុង cDNA នៅ​សីតុណ្ហភាព​ទាប ដែល​នាំ​ឱ្យ​ប្រសិទ្ធភាព​នៃ​ការ​រក​ឃើញ​មាន​ការ​កាត់​បន្ថយ។RT-qPCR ប្រពៃណីជាទូទៅតម្រូវឱ្យមានការចូលរួមពីអង់ស៊ីមសំខាន់ៗពីរ (បញ្ច្រាស transcriptase និង DNA polymerase) ដែលធ្វើឱ្យវាមិនអាចសម្រួលដល់ប្រតិបត្តិការនៃប្រព័ន្ធប្រតិកម្ម និងកាត់បន្ថយការចំណាយ។នៅទីនេះ យើងនឹងណែនាំប្រតិចារិកបញ្ច្រាសដែលធន់នឹងសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ពីរគឺ TtH និង RevTaq ។អង់ស៊ីមទាំងពីរនេះក៏មានមុខងារ DNA polymerase ដែរ ដូច្នេះពួកវាត្រូវបានគេហៅថាអង់ស៊ីម bifunctional ។

TtH DNA polymerase

អ្នកច្បាស់ជាធ្លាប់លឺអំពី TtH ដែលកើតចេញពីបាក់តេរី Thermus thermophilus HB8។នៅក្នុងវត្តមាននៃ cations divalent ដូចជា Mg2+ វាមានសកម្មភាព DNA polymerase ។វាត្រូវបានគេប្រើយ៉ាងទូលំទូលាយនៅក្នុងប្រតិកម្ម PCR ដូចជាអង់ស៊ីម Taq ប៉ុន្តែវាមានភាពធន់នឹងកំដៅខ្ពស់ជាងអង់ស៊ីម Taq ដូច្នេះវាក៏មានឥទ្ធិពលល្អលើ PCR ជាមួយនឹងគំរូមាតិកា GC ខ្ពស់។

· អង់ស៊ីមនេះជាមូលដ្ឋានមិនមានសកម្មភាព 3′→5′ exonuclease និង 5′→3′ សកម្មភាព exonuclease ដូច្នេះវាក៏អាចត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការធ្វើលំដាប់ Dideoxy ផងដែរ។

· អង់ស៊ីមនេះមានសកម្មភាព RTase ។នៅក្នុងវត្តមានរបស់ Mn2+ សកម្មភាព RTase នឹងត្រូវបានពង្រឹង។ដោយប្រើលក្ខណៈពិសេសនេះ វាអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីអនុវត្តប្រតិកម្មបញ្ច្រាសនិងប្រតិកម្ម PCR នៅក្នុងបំពង់តែមួយ នោះគឺ RT-PCR មួយជំហាន។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយនៅក្នុងវត្តមានរបស់ Mn2+ ភាពត្រឹមត្រូវនៃ RT-PCR គឺមិនខ្ពស់ទេ។សកម្មភាព RT មិនពាក់ព័ន្ធនឹងសកម្មភាព rnaase H ទេ។

· សកម្មភាពកើនឡើងនៃ Tth-DNA polymerase (pH9, ល្អបំផុត +55 ℃ ~ + 70 ℃ , អតិបរមា +95 ℃ ) យកឈ្នះលើបញ្ហាដែលបណ្តាលមកពីរចនាសម្ព័ន្ធអនុវិទ្យាល័យ RNA ។cDNA លទ្ធផលអាចត្រូវបានពង្រីកដោយ PCR ជាមួយនឹងអង់ស៊ីមដូចគ្នានៅក្នុងវត្តមាននៃអ៊ីយ៉ុង Mg2+ ។

· សមត្ថភាពរបស់ Tth-DNA polymerase ដើម្បីអនុវត្តការចម្លងបញ្ច្រាស និងការពង្រីក DNA នៅសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ធ្វើឱ្យអង់ស៊ីមនេះមានប្រយោជន៍សម្រាប់ការវិភាគបរិមាណ RT-PCR ការក្លូន និងការវិភាគហ្សែននៃ RNA កោសិកា និងមេរោគ។
· Tth-DNA polymerase ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ RT-PCR ដើម្បីពង្រីក RNA រហូតដល់ 1kb ។

លក្ខណៈពិសេសនិងគុណសម្បត្តិ

ឌីអេនអេ ប៉ូលីមេរ៉ាស

• ធានាបាននូវទំហំផលិតផលប្រតិកម្មខ្សែសង្វាក់ polymerase (PCR) ដែលត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរ យ៉ាងហោចណាស់ 1000 bp ក្នុងប្រតិកម្ម RT-PCR

• ទទួលយក deoxyribonucleoside triphosphate ដែលបានកែប្រែជាស្រទាប់ខាងក្រោម

• មិនទាក់ទងនឹងសកម្មភាព RNase H ទេ។

• មានស្ថេរភាពកំដៅខ្ពស់ដើម្បីជម្នះបញ្ហា ដែលជាធម្មតាទាក់ទងទៅនឹងរចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំខ្ពស់ដែលមានវត្តមាននៅក្នុង RNA

RevTaq RT-PCR DNA polymerase

DNA polymerase ធន់នឹងកំដៅ ជាមួយនឹងសកម្មភាព transcriptase បញ្ច្រាស

RevTaq-RT-PCR-DNA polymerase គឺជាអង់ស៊ីមដែលធន់នឹងកំដៅខ្ពស់ មុខងារពីរដែលមានសកម្មភាព transcriptase បញ្ច្រាស និង DNA polymerase ដែលទទួលបានតាមរយៈការវិវត្តន៍ផ្ទាល់ និងសិប្បនិម្មិត។

· ពាក់កណ្តាលជីវិតរបស់ RevTaq RT-PCR DNA polymerase នៅ 95°C គឺធំជាង 40 នាទី។

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase អនុញ្ញាត​ឱ្យ​ប្រតិចារឹក​បញ្ច្រាស​សីតុណ្ហភាព​ខ្ពស់​ដោយផ្ទាល់​ពី​គំរូ RNA ហើយ​ជំហាន​ចម្លង​បញ្ច្រាស​អាច​ត្រូវ​បាន​ធ្វើ​ម្តងទៀត​ច្រើន​ដង​ដើម្បី​បង្កើត​គំរូ cDNA បន្ថែមទៀត។

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase អនុញ្ញាតឱ្យ "សូន្យជំហាន" RT-PCR (មិនមានជំហានចម្លងបញ្ច្រាស isothermal) ពីព្រោះនៅក្នុងជំហានបន្ថែម PCR វដ្ត ការចម្លងបញ្ច្រាស និងការពង្រីក DNA កើតឡើងក្នុងពេលដំណាលគ្នា។នេះក៏លើកកម្ពស់ប្រតិកម្មចម្លងបញ្ច្រាសនៅសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ ដោយហេតុនេះកាត់បន្ថយបញ្ហាដែលបានជួបប្រទះក្នុងការរលាយរចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំខ្លាំងនៅក្នុង RNA នៅសីតុណ្ហភាពខ្ពស់។

· ដោយសារតែរូបមន្ត hot-start ដែលមានមូលដ្ឋានលើ aptamer RevTaq RT-PCR DNA polymerase នឹងផ្តល់លទ្ធផលប្រសើរជាងមុន នៅពេលដែលសីតុណ្ហភាព annealing និង extension ខ្ពស់ជាង 57°C។

· ដោយសារអង់ស៊ីមធន់នឹងកំដៅ វាត្រូវបានណែនាំអោយរចនា primers និង probes ដែលមានចំណុចរលាយខ្ពស់ខ្លាំង (>60°C)។

· វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យបង្កើនប្រសិទ្ធភាពសីតុណ្ហភាពនៃជំហាន annealing/extension តាមរយៈជម្រាលសីតុណ្ហភាពក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការរៀបចំប្រតិកម្ម។

· សីតុណ្ហភាពកាន់តែខ្ពស់ ភាពជាក់លាក់របស់ PCR កាន់តែខ្ពស់។វដ្តប្រតិចារិកបញ្ច្រាសជាធម្មតាត្រូវបានអនុវត្តនៅសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ជាងវដ្ត PCR ពីព្រោះ DNA Primer:RNA Template hybridization ជាធម្មតាមានចំណុចរលាយខ្ពស់ជាង DNA Primer:cDNA Template duplex។

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase ត្រូវបានវិស្វកម្មហ្សែន និងធ្វើឱ្យប្រសើរ ហើយទំហំ amplicon ស្ថិតនៅចន្លោះ 60-300 bp ។

ដែនកំណត់រកឃើញ RevTaq RT-PCR DNA polymerase ឈានដល់ 4 ច្បាប់ចម្លង/

ប្រព័ន្ធប្រតិកម្មដែលប្រសើរឡើង (ការបង្កើតបឋមនៃចំណុចរលាយខ្ពស់) ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូប។RevTaq RT-PCR DNA polymerase-driven RT-PCR បង្ហាញភាពប្រែប្រួលប្រសើរជាង TaqPath 1-step RT-qPCR master mix និងការរកឃើញទាបនៃជម្រាលការរំលាយគំរូ។

អត្ថប្រយោជន៍បន្ថែម៖

មុខងារចាប់ផ្តើមរហ័ស → ជំហាននៃការប្រែពណ៌កម្ដៅដំបូងអាចត្រូវបានរំលង។

Hot-start aptamer formula → ផ្តល់សកម្មភាពអង់ស៊ីម 100% ភ្លាមៗ និងការពារការពង្រីកមិនជាក់លាក់នៅសីតុណ្ហភាពទាប (<57°C)។

មុខងារ Cleavage → ជំហានទាញយក RNA ត្រូវបានលុបចោល ពីព្រោះ RevTaq RT-PCR DNA polymerase ក៏អាចដំណើរការគំរូប្រតិកម្មឆៅផងដែរ។វាអាចបំផ្លាញភ្នាសកោសិកានៃ eukaryotes បាក់តេរី និងមេរោគភ្លាមៗនៅក្នុងវដ្ត RT-PCR ក្តៅ។

កម្រិតវត្ថុធាតុដើម IVD → ស្តង់ដារគុណភាពខ្ពស់ និងតម្លៃប្រកួតប្រជែងខ្លាំង