គន្លឹះសម្រាប់កែលម្អការស្តារឡើងវិញនូវកាវ

1. បង្កើនការផ្ទុកគំរូកំឡុងពេល electrophoresis ។

2. ប្រើសតិបណ្ដោះអាសន្ន electrophoresis ដែលបានរៀបចំថ្មីៗ។

3. នៅពេលកាត់កាវ ព្យាយាមកាត់តែកាវជាមួយបន្ទះដើម្បីកាត់បន្ថយបរិមាណនៃការកាត់កាវ៖ មិនត្រូវការកាវដែលមានបំណែកគោលបំណងតិចតួចទេ បើមិនដូច្នេះទេវានឹងប៉ះពាល់ដល់អត្រានៃការស្តារឡើងវិញ។

4. បនា្ទាប់ពីរលាយបំណែកនៃកាវពីរឬច្រើនសូមប្រើបំពង់មួយមិនថាបរិមាណធំប៉ុនណាហើយផ្ទេរវាទៅជួរឈរដូចគ្នា។

5. សូលុយស្យុងដែលបានបន្ថែមនៅក្នុងសូលុយស្យុងអាចមានច្រើនជាងនេះបន្តិច ដែលអំណោយផលដល់ការភ្ជាប់ DNA ទៅនឹងភ្នាស ប៉ុន្តែជាទូទៅមិនលើសពី 750ul ។

6. គន្លឹះក្នុងការស្តារជែលគឺដើម្បីចង DNA ទៅនឹងជួរឈរតាមរយៈកំហាប់អំបិល ទឹកអាស៊ីត (បន្ទុក) និង hydrophobicity នៃដំណោះស្រាយនៅក្នុងជួរឈរ។ដូច្នេះប្រសិនបើ pH នៃសតិបណ្ដោះអាសន្ន electrophoresis ខ្ពស់ពេក 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) អាចត្រូវបានបន្ថែមទៅសូលុយស្យុង។ដើម្បីស្ទាក់ចាប់ម៉ូលេគុល DNA នៅលើភ្នាសបានប្រសើរជាងមុន 30% isopropanol អាចត្រូវបានបន្ថែមទៅកំដៅទៅក្នុងអង្គធាតុរាវបន្ទាប់ពីរំលាយកាវ។

7. មុននឹងបន្ថែមអេតាណុល ទុកជួរឈរនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ពីរបីនាទី (ប្រហែល 10 នាទី) ដើម្បីហួតអេតាណុលទាំងស្រុង។

8. ជាចុងក្រោយ បន្ថែមភាពវៃឆ្លាតតិច ដើម្បីកាត់បន្ថយបរិមាណនៃការស្តារឡើងវិញ។ជាទូទៅ 30-50μl eluent ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការ elution (មិនតូចពេក, បើមិនដូច្នេះទេវានឹងមិនអាចសើមភ្នាស, ដែលមិនអំណោយផលដល់ elution);ដំណក់ទឹក elution គឺស្ថិតនៅចំកណ្តាលនៃភ្នាស ដើម្បីបញ្ជាក់យ៉ាងពេញលេញនូវ DNA ដែលភ្ជាប់ទៅនឹងភ្នាស។

9. បន្ទាប់ពីបន្ថែមវត្ថុធាតុរួច គេអាចបោះចោលក្នុងអាងទឹក 55 ដឺក្រេ រយៈពេល 5 នាទី ឬដាក់ក្នុងអាងទឹក 50 ដឺក្រេ លើសពី 10 នាទី ឬបិទជិតដោយប៉ារ៉ាហ្វីលនៅសីតុណ្ហភាព 4 ដឺក្រេពេញមួយយប់ ហើយបន្ទាប់មក centrifuged សម្រាប់ការងើបឡើងវិញនៅថ្ងៃបន្ទាប់ ប្រសិទ្ធភាពគឺល្អ។

10. បន្ថែម centrifuged eluate ត្រឡប់ទៅជួរឈរ adsorption និង centrifuge ម្តងទៀត។

វិធីសាស្រ្ត និងនីតិវិធីលម្អិតសម្រាប់ការស្តារផលិតផល PCR

1. ការកែច្នៃកៅស៊ូធម្មតា។

ប្រសិនបើ​អ្នក​ចង់​យក​កាវ​មកវិញ យក​ល្អ​គួរតែ​ប្រើ​ឧបករណ៍​ដែល​ងាយស្រួល​ហើយ​មាន​អត្រា​ងើប​ឡើង​វិញ​ខ្ពស់​បន្តិច។ប្រសិនបើអ្នកពិតជាត្រូវការសង្គ្រោះវាដោយដៃ អ្នកអាចបន្ថែមបរិមាណ TE 3 ដង បន្ទាប់ពីកាត់កាវ។បន្ទាប់ពីរលាយក្នុងអាងងូតទឹក សារធាតុ phenol, phenol/chloroform ត្រូវបានស្រង់ចេញយ៉ាងស្អាត ហើយអេតាណុលត្រូវបាន precipitated ។នោះ​ហើយ​ជា​វា។

2. ការងើបឡើងវិញ DNA ពីជែលដែលមានចំណុចរលាយទាប

ការបន្សុតនៃបំណែក DNA បន្ថែម TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) ស្មើនឹងបរិមាណនៃជែល ហើយដាក់ក្នុងទឹក 65°C រយៈពេល 5 នាទីដើម្បីរំលាយជែលទាំងស្រុង។

បន្ទាប់ពីវាត្រូវបាននាំយកទៅសីតុណ្ហភាពក្នុងបន្ទប់ បរិមាណស្មើគ្នានៃ phenol (ឆ្អែតជាមួយ TE, TE ត្រូវបានផ្សាភ្ជាប់នៅក្នុងស្រទាប់ខាងលើ ហើយស្រទាប់ខាងក្រោមនៃ phenol ត្រូវបានដកចេញ) ហើយល្បាយនេះត្រូវបានលាយបញ្ចូលគ្នាដោយថ្នមៗ (មិនចាំបាច់លាយ) និង centrifuged នៅ 12,000 rpm រយៈពេល 3 នាទី។ធ្វើម្តងទៀត 1-2 ដង។

យក supernatant បន្ថែម 0.1 បរិមាណ 3mol/L sodium acetate (pH 5.2) និង 2.5 ដងនៃបរិមាណអេតាណុលដាច់ខាត ដើម្បីអនុវត្តទឹកភ្លៀងអេតាណុល។រំលាយ DNA ដែលបានបន្សុតជាមួយនឹងបរិមាណសមស្របនៃ TE វាស់មាតិកា និងរៀបចំសម្រាប់ការប្រើប្រាស់ (វាអាចត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការវិភាគរចនាសម្ព័ន្ធហ្សែនគោលដៅ ការរៀបចំការស៊ើបអង្កេត។ល។)។

3. ការងើបឡើងវិញ PCR ជាមួយនឹងភាពជាក់លាក់នៃការពង្រីកដ៏ល្អ

ប្រសិនបើភាពជាក់លាក់នៃការពង្រីក PCR គឺល្អ វាគ្រាន់តែជាការបន្សុត និងការស្ដារឡើងវិញនូវផលិតផល PCR ដ៏សាមញ្ញប៉ុណ្ណោះ។អ្នកអាចបន្ថែម 50ug/ml proteinase K ទៅក្នុងផលិតផល PCR 37 ដឺក្រេសម្រាប់រយៈពេល 1 ម៉ោង ស្រង់ចេញម្តងជាមួយ phenol/chloroform ស្រង់ចេញម្តងជាមួយ chloroform និងបន្ថែមបរិមាណ 0.1 នៃ supernatant ។សូដ្យូមអាសេតាតត្រូវបានរកឃើញវិញដោយទឹកភ្លៀងជាមួយនឹងបរិមាណអេតាណុលដាច់ខាត 2.5 ។

ផលិតផលដែលពាក់ព័ន្ធ៖

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/