នាំមុខ

Long non-coding RNA, lncRNA គឺជា RNA ដែលមិនសរសេរកូដដែលមានប្រវែងធំជាង 200 nucleotides ជាទូទៅចន្លោះពី 200-100000 nt ។lncRNA គ្រប់គ្រងការបញ្ចេញហ្សែននៅកម្រិត epigenetic, transcription និង post-transcriptional ហើយចូលរួមក្នុងការបំបិទក្រូម៉ូសូម X, genome imprinting and chromatin, transcription activation, transcription interference, ការដឹកជញ្ជូននុយក្លេអ៊ែរ, បទប្បញ្ញត្តិនៃវដ្តកោសិកា, ការគ្រប់គ្រងភាពខុសគ្នានៃកោសិកា និងផលប៉ះពាល់សំណងកម្រិតថ្នាំ (ការវិវត្តនៃផលប៉ះពាល់នៃការប្រើប្រាស់ថ្នាំ) និងដំណើរការសំខាន់ៗជាច្រើនទៀតនៃការគ្រប់គ្រងរបស់មនុស្ស។ បច្ចុប្បន្នជាចំណុចក្តៅមួយក្នុងវិស័យជីវវេជ្ជសាស្ត្រ។

01  ប្រភេទនិងលក្ខណៈនៃ LncRNA

lncRNA ត្រូវបានបែងចែកជាច្រើនប្រភេទ យោងទៅតាមប្រភពផ្សេងៗគ្នានៃការបង្កើតរបស់វា ដូចបង្ហាញក្នុងរូបភាពខាងលើ។មានលក្ខណៈដូចខាងក្រោមៈ

1. lncRNAs ជាធម្មតាមានរយៈពេលយូរជាងនេះ ជាមួយនឹងការបញ្ចេញមតិថាមវន្ត និងវិធីបំបែកផ្សេងគ្នា កំឡុងពេលខុសគ្នា
2. បើប្រៀបធៀបជាមួយនឹងហ្សែនសរសេរកូដ LncRNA ជាធម្មតាមានកម្រិតបញ្ចេញមតិទាបជាង
3. lncRNAs ភាគច្រើនមានភាពជាក់លាក់នៃការបញ្ចេញមតិខាងសាច់ឈាម និងលំហរជាក់ស្តែងនៅក្នុងដំណើរការនៃការផ្លាស់ប្តូរ និងការអភិវឌ្ឍន៍ជាលិកា
4. មានការបង្ហាញលក្ខណៈនៅក្នុងដុំសាច់និងជំងឺផ្សេងៗទៀត
5. ទីតាំង subcellular នៃ lncRNA មានភាពចម្រុះ
6. លំដាប់នៃការអភិរក្សមានកម្រិតទាប ប៉ុន្តែមុខងារមានកម្រិតជាក់លាក់នៃការអភិរក្ស។ល។

02 សំណួរដែលគេសួរញឹកញាប់អំពីការចម្លងបញ្ច្រាស LncRNA

ដោយសារតែមាតិកាទាបនៃ lncRNA នៅក្នុងកោសិកា ប្រវែងវែង និងរចនាសម្ព័ន្ធកម្រិតខ្ពស់ RNA បែបនេះច្រើនតែមានរចនាសម្ព័ន្ធស្មុគ្រស្មាញដូចជារង្វិលជុំដើម ឬ hairpins ហើយ RT-qPCR ងាយនឹងមានបញ្ហានៃការចម្លងបញ្ច្រាសមិនជោគជ័យ ឬប្រសិទ្ធភាពទាប។

03 ដំណោះស្រាយការចម្លងបញ្ច្រាស LncRNA

នៅក្នុងច្បាប់កណ្តាល ដំណើរការនៃមេរោគ RNA ដោយប្រើ transcriptase បញ្ច្រាសផ្ទាល់របស់ពួកគេដើម្បីសំយោគ DNA ដោយប្រើ RNA ជាគំរូមួយត្រូវបានគេហៅថា reverse transcription ។ដំណើរការនៃការប្រើប្រាស់ RNA virus reverse transcriptase ដើម្បីសំយោគ cDNA template in vitro ត្រូវបានគេហៅថា reverse transcription។ធាតុសំខាន់ៗដែលរួមបញ្ចូលនៅក្នុងប្រព័ន្ធប្រតិចារិកបញ្ច្រាស៖ គំរូ RNA, បញ្ច្រាស transcriptase, primers និងសមាសធាតុផ្សេងទៀត។

គំរូ 1.RNA

ឥទ្ធិពលនៃគំរូ RNA លើការចម្លងបញ្ច្រាសត្រូវបានឆ្លុះបញ្ចាំងនៅក្នុងរចនាសម្ព័ន្ធ ភាពបរិសុទ្ធ និងសុចរិតភាពរបស់វា។ភាពបរិសុទ្ធ និងសុចរិតភាពនៃ RNA ដែលស្រង់ចេញកាន់តែខ្ពស់ ប្រសិទ្ធភាពនៃការចម្លងបញ្ច្រាសកាន់តែខ្ពស់ និងភាពត្រឹមត្រូវជាងមុន លទ្ធផលបរិមាណជាបន្តបន្ទាប់។RNA បន្សុតដោយសារធាតុចម្រាញ់យក RNA ដែលប្រើជាទូទៅជាញឹកញាប់មានសំណល់នៃជាតិអាល់កុល និងអំបិល guanidine ដែលមានឥទ្ធិពលរារាំងយ៉ាងខ្លាំងលើការចម្លងបញ្ច្រាសភាគច្រើន។

2.Reverse transcriptase

Reverse transcriptase មានឥទ្ធិពលសំខាន់នៅក្នុងប្រព័ន្ធប្រតិចារិកបញ្ច្រាសទាំងមូល។សីតុណ្ហ​ភាព​សមរម្យ​សម្រាប់​ការ​ចម្លង​បញ្ច្រាស​ដែល​ប្រើ​នៅ​ក្នុង​មន្ទីរ​ពិសោធន៍​ភាគ​ច្រើន​ជា​ទូ​ទៅ​គឺ 42°C ។ជាការពិតការបើករចនាសម្ព័ន្ធ RNA កម្រិតខ្ពស់ទាមទារឱ្យមានសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ហើយតម្រូវការសម្រាប់ transcriptase បញ្ច្រាសគឺខ្ពស់ជាង។

3.ថ្នាំ primer

ថ្នាំ primers ចម្លងបញ្ច្រាសរួមមាន primers ជាក់លាក់ហ្សែន, primers ចៃដន្យ និង Oligo dT primers ។lncRNAs ភាគច្រើនមិនមានកន្ទុយ polyA ទេ ហើយវាមានសារៈសំខាន់ក្នុងការផ្គូផ្គង primers ចៃដន្យជាមួយ Oligo dT ឱ្យបានត្រឹមត្រូវ។

4. សមាសធាតុផ្សេងទៀត។

ដោយមើលឃើញពីការពិតដែលថា RNA មានភាពងាយស្រួលក្នុងការបន្ទាបបន្ថោក ការណែនាំនៃសមាសធាតុនៅក្នុងប្រព័ន្ធប្រតិចារិកបញ្ច្រាសអាចត្រូវបានបង្រួមអប្បបរមា ដែលអាចទប់ស្កាត់ការចូលរបស់ RNase ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព និងធានាបាននូវដំណើរការរលូននៃការចម្លងបញ្ច្រាស។

Fអូរីហ្សែនទទួលបានពីគំរូ RNA ការចម្លងបញ្ច្រាសទៅ qPCR

ការពារការរកឃើញ lncRNA របស់អ្នកយ៉ាងទូលំទូលាយ

សត្វសរុប RNA Iការសំរាកលំហែកញ្ចប់ (ជាមួយជួរឈរដក gDNA)

ក្រឡាសរុប RNA Iការសំរាកលំហែកញ្ចប់ (ជាមួយជួរឈរដក gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (ជាមួយ gDNase) (Super Premix សម្រាប់ការសំយោគ cDNA ខ្សែទីមួយពី lncRNA)

ពេលវេលាពិត PCR EasyTM-SYBR Green I

Aគុណសម្បត្តិ ofការទាញយក RNA៖

ឧបករណ៍ប្រើប្រាស់បច្ចេកវិទ្យាទាញយក RNA ជំនាន់ទី 3 មិនចាំបាច់ប្រើ DNase ទេ។

11 នាទីពី 96, 24, 12, និង 6-cell plated cultured cells, high-efficiency plated extraction of high-efficient of gDNA-free, high-purity, high-quality excellent cell culture RNA.

អត្ថប្រយោជន៍នៃការចម្លងបញ្ច្រាស lncRNA៖

ប្រព័ន្ធប្រតិចារិកបញ្ច្រាសដែលត្រូវបានបង្កើតឡើងជាពិសេសសម្រាប់ LncRNA ដើម្បីលុបការចម្លងរោគ DNA ហ្សែនយ៉ាងឆាប់រហ័ស។

ប្រព័ន្ធប្រតិចារឹកបញ្ច្រាសមានស្ថេរភាពកម្ដៅខ្ពស់ ហើយនៅតែមានដំណើរការប្រតិចារិកបញ្ច្រាសដ៏ល្អនៅ 50°C។

គំរូដែលមានមាតិកា GC ខ្ពស់ និងរចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំដ៏ស្មុគស្មាញអាចត្រឡប់វិញបានជាមួយនឹងប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់។

គុណសម្បត្តិof qPCR៖

ការចាប់ផ្តើមក្តៅ Foregene Taq Polymerase មានប្រសិទ្ធភាព amplification ខ្ពស់ ភាពប្រែប្រួលនៃ amplification កាន់តែខ្ពស់ និងភាពជាក់លាក់នៃ amplification កាន់តែខ្ពស់

Real PCR Easy Mix ដែលត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរធ្វើឱ្យ SYBR Green I មានភាពរសើបក្នុងការរកឃើញខ្ពស់ ហើយអាំងតង់ស៊ីតេហ្វ្លុយអូរីសរបស់វាគឺ 3-5 ដងនៃផលិតផលស្រដៀងគ្នា ដែលអាចបំពេញតម្រូវការនៃប្រភេទផ្សេងគ្នានៃការពិសោធន៍បរិមាណហ្វ្លុយអូរីស។