បង្កើតការពិសោធន៍ PCR SOP ដើម្បីធ្វើស្តង់ដារឥរិយាបថរបស់បុគ្គលិកពិសោធន៍។
អ្នកពិសោធន៍គោរពយ៉ាងតឹងរ៉ឹងនូវនីតិវិធីប្រតិបត្តិការ និងកាត់បន្ថយការបំពុល PCR ដែលអាចបណ្តាលមកពីកត្តាមនុស្ស ឬការពារការបំពុលបរិស្ថាន។លើសពីនេះទៀត អ្នកពិសោធន៍គួរតែមានចំណេះដឹង និងជំនាញវិជ្ជាជីវៈដែលត្រូវគ្នា រួមទាំងភាពស្ទាត់ជំនាញក្នុងប្រតិបត្តិការឧបករណ៍ពាក់ព័ន្ធ ការបញ្ជាក់ពីដំណើរការការងារទាំងមូល ស្ទាត់ជំនាញវិធីព្យាបាលការចម្លងរោគ និងវិធីសាស្ត្រត្រួតពិនិត្យគុណភាពមន្ទីរពិសោធន៍ និងអាចបកស្រាយលទ្ធផលតេស្តបានត្រឹមត្រូវ។
បង្កើតមន្ទីរពិសោធន៍ PCR ស្តង់ដារ។
មន្ទីរពិសោធន៍ PCR ចែកចេញជាបួនផ្នែកជាគោលការណ៍គឺ តំបន់រៀបចំ reagent តំបន់ដំណើរការគំរូ តំបន់ពង្រីក និងតំបន់វិភាគផលិតផលពង្រីក។តំបន់ពីរដំបូងគឺជាតំបន់ពង្រីកមុន ហើយតំបន់ពីរចុងក្រោយគឺជាតំបន់ក្រោយការពង្រីក។តំបន់មុនពង្រីក និងតំបន់ក្រោយការពង្រីក គួរតែត្រូវបានបំបែកយ៉ាងតឹងរ៉ឹង។សមា្ភារៈពិសោធន៍ សារធាតុប្រតិកម្ម ក្រដាសកត់ត្រា ប៊ិច សមា្ភារៈលាងសម្អាតជាដើម អាចហូរចេញពីកន្លែងពង្រីកមុនទៅតំបន់ពង្រីកក្រោយ ពោលគឺពីតំបន់រៀបចំសារធាតុ → តំបន់ដំណើរការគំរូ → តំបន់ពង្រីក → តំបន់វិភាគផលិតផលពង្រីក ហើយមិនត្រូវហូរថយក្រោយឡើយ។លំហូរខ្យល់នៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ក៏គួរហូរចេញពីតំបន់មុនពង្រីកទៅតំបន់ក្រោយការពង្រីកផងដែរ និងមិនហូរថយក្រោយ។ការរចនាមន្ទីរពិសោធន៍ PCR ដ៏ល្អត្រូវបានបង្ហាញខាងក្រោម៖
រូបភាព A: របៀបរៀបចំមន្ទីរពិសោធន៍ PCR សមស្របជាមួយនឹងសម្ពាធអវិជ្ជមាននៅក្នុងបន្ទប់សតិបណ្ដោះអាសន្ន
រូបភាព B: របៀបរៀបចំមន្ទីរពិសោធន៍ PCR សមស្របជាមួយនឹងសម្ពាធវិជ្ជមាននៅក្នុងបន្ទប់សតិបណ្ដោះអាសន្ន
ដ្យាក្រាមនៃការរៀបចំមន្ទីរពិសោធន៍ PCR ដែលបានផ្ដល់ឱ្យក្នុងរូបភាព A និងរូបភាព B គួរតែជារបៀបរៀបចំដ៏ល្អជាង ហើយបន្ទប់ពិសោធន៍ដែលមានលក្ខខណ្ឌអាចយោងទៅរបៀបនេះសម្រាប់ការរចនា។សម្រាប់មន្ទីរពិសោធន៍ធម្មតា វាត្រូវបានណែនាំថា តំបន់ពង្រីក PCR និងតំបន់វិភាគផលិតផលអាចបំបែកបាន ហើយការបើកគម្របគួរតែត្រូវបានកាត់បន្ថយតាមដែលអាចធ្វើទៅបាននៅក្នុងតំបន់រៀបចំគំរូ និងតំបន់ពង្រីក PCR ។ចងចាំ៖ ផលិតផល និងការផ្គត់ផ្គង់ពិសោធន៍នៅក្នុងតំបន់វិភាគផលិតផលត្រូវបានហាមឃាត់យ៉ាងតឹងរ៉ឹងពីការនាំយកទៅកន្លែងរៀបចំគំរូ និងតំបន់ពង្រីក PCR ។
ប្រសិនបើមន្ទីរពិសោធន៍អនុវត្តតែការរកឃើញ PCR និងកំណត់អត្តសញ្ញាណ វាត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើ PCR បរិមាណ fluorescent ជំនួសឱ្យ PCR ធម្មតា។
លទ្ធផលរកឃើញ PCR បរិមាណ fluorescence អាចត្រូវបានប្រមូលនិងវិភាគដោយសញ្ញា fluorescence ដូច្នេះមិនចាំបាច់បើកគម្របសម្រាប់ electrophoresis បន្ទាប់ពីប្រតិកម្មដែលជៀសវាងការចម្លងរោគផលិតផល PCR ដែលបណ្តាលមកពីការលេចធ្លាយនៃផលិតផលប្រតិកម្មដើម្បីបង្កើតជា aerosols ។ប្រសិនបើអ្នកបង្កើនចំនួននៃការបើកមួកកំឡុងពេលផ្ទុក gel electrophoresis ការចម្លងរោគនៃ aerosol ទំនងជានឹងកើតឡើង។វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យលើកកម្ពស់ការអនុវត្ត PCR បរិមាណ និងបន្តិចម្តងជំនួស PCR គុណភាព។
ប្រព័ន្ធប្រឆាំងមេរោគ PCR របស់ UNG ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ប្រតិកម្ម PCR ។
ប្រព័ន្ធប្រើ dUTP ជំនួសឱ្យ dTTP ។បន្ទាប់ពីប្រតិកម្ម PCR ផលិតផល PCR ទាំងអស់ (បំណែក DNA) ត្រូវបានដាក់បញ្ចូលជាមួយ dUTP ។នៅក្នុងជុំបន្ទាប់នៃប្រតិកម្ម PCR អង់ស៊ីម UNG ដែលត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងប្រព័ន្ធត្រូវបាន incubated នៅ 37 ° C សម្រាប់រយៈពេល 5 នាទីមុនពេល PCR ដែលជាពិសេសអាច degrade បំណែក DNA ទាំងអស់ដែលមាន dUTP ហើយបន្ទាប់មកធ្វើប្រតិកម្ម PCR ។នេះអាចលុបបំបាត់ការចម្លងរោគ aerosol ដែលបណ្តាលមកពីផលិតផល PCR ទាំងស្រុង។ឥទ្ធិពលត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពខាងក្រោម៖
ចំណាំ៖ សម្រាប់ស៊េរី PCR ផ្ទាល់ អ្នកអាចជ្រើសរើសផលិតផលស៊េរីនៃប្រព័ន្ធប្រឆាំងមេរោគ PCR ផលិតផល Foregeneណែនាំ
សម្រាប់មន្ទីរពិសោធន៍ដែលធ្វើតេស្ដ genotyping ទ្រង់ទ្រាយធំ វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍យ៉ាងខ្លាំងឱ្យប្រើប្រព័ន្ធប្រឆាំងមេរោគ PCR ផលិតផល UNG សម្រាប់ការធ្វើតេស្ត reagents បន្ថែមពីលើការសាងសង់មន្ទីរពិសោធន៍សមហេតុផល។
ការរំលឹក៖ ការប្រើប្រាស់ប្រព័ន្ធនេះមិនអាចលុបការចម្លងរោគផលិតផល PCR ដែលត្រូវបានបង្កឡើងរួចហើយនោះទេ។ដូច្នេះ ប្រព័ន្ធ UNG គួរតែត្រូវបានប្រើនៅដើមដំបូងនៃការធ្វើតេស្តដែលពាក់ព័ន្ធ ហើយប្រព័ន្ធ UNG គួរតែត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការពង្រីក PCR ដូច្នេះដើម្បីការពារការចម្លងរោគនៃផលិតផល PCR ក្លែងក្លាយ។
វាត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើប្រព័ន្ធ Direct PCR-UNG នៃ Foregene នៅពេលធ្វើតេស្តទ្រង់ទ្រាយធំដូចជា៖
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG;
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG;
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG;
ឧបករណ៍ PCR ផ្ទាល់របស់ត្រី Zebra Fish-UNG ។
ស៊េរីនៃកញ្ចប់នេះពី Foregeneមិនត្រឹមតែអាចធ្វើការរកឃើញ PCR យ៉ាងឆាប់រហ័ស និងក្នុងទ្រង់ទ្រាយធំប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែថែមទាំងអាចការពារ និងគ្រប់គ្រងការចម្លងរោគផលិតផល PCR យ៉ាងមានប្រសិទ្ធភាពផងដែរ។
ពេលវេលាប្រកាស៖ ថ្ងៃទី ១៩ ខែមីនា ឆ្នាំ ២០២១
