ការវិភាគខាងក្រោមនៃបញ្ហាដែលអាចកើតមាននៅក្នុងBuccalswab/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.
ជួរឈរបន្សុតត្រូវបានស្ទះ
នៅក្នុងឧបករណ៍នេះ ក្នុងប្រតិបត្តិការស្រង់ចេញ DNA ហ្សែន ជួរឈរបន្សុតត្រូវបានស្រូបយកដោយផ្ទាល់លើល្បាយ lysis enzymatic គំរូដោយគ្មានជំហាន centrifugation ហើយជួរឈរបន្សុតអាចនឹងត្រូវបានរារាំងដោយសារតែ enzymization មិនពេញលេញ និង viscosity ខ្ពស់នៃគំរូ។
មូលហេតុដែលអាចកើតមានមានដូចខាងក្រោម៖
1. ការរំលាយអាហារអង់ស៊ីមមិនពេញលេញនៃគំរូជាលិកា។
អនុសាសន៍៖ ពេលវេលាដំណើរការគំរូនៃ Foregene Protease អាចត្រូវបានពង្រីកដោយសមរម្យ ឬអាចយក supernatant បន្ទាប់ពីការ centrifugation នៅ 12,000 rpm (~13,400 ។× g) រយៈពេល 5 នាទី។
2. ការប្រើប្រាស់លើសនៃសំណាកជាលិកា ឬជាលិកាធំ។
អនុសាសន៍៖ ល្អបំផុតមិនត្រូវលើសពី ១Buccal swab នៅក្នុងគំរូ;ប្រសិនបើគំរូមានទំហំធំពេក បង្កើនកម្រិតថ្នាំ Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 ទៅតាមនោះ។
3. viscosity គំរូគឺខ្ពស់ពេក។
អនុសាសន៍៖ គំរូអាចត្រូវបានពនលាយដោយ 10 mM នៃ Tris-HCl មុនពេលទាញយក DNA ហ្សែន។
4. បំណែកនៃកាតឈាមត្រូវបានបូម។
ការណែនាំ៖ ពេលវេលានៃការចាប់កណ្តាលបណ្តោះអាសន្ននៃជំហានទី 6 នៃការទាញយកហ្សែននៃកន្លែងឈាម (FTA Card) អាចត្រូវបានពង្រីកយ៉ាងសមស្រប។
ទិន្នផលទាប ឬគ្មាន DNA
ជារឿយៗមានកត្តាជាច្រើនដែលប៉ះពាល់ដល់ទិន្នផល DNA ហ្សែន រួមទាំងប្រភពដើមគំរូ លក្ខខណ្ឌផ្ទុកគំរូ ការរៀបចំគំរូ ការរៀបចំជាដើម។
DNA ហ្សែនមិនអាចទទួលបានកំឡុងពេលទាញយក
មូលហេតុដែលអាចកើតមានមានដូចខាងក្រោម៖
1. ការរក្សាទុកសំណាក ឬការផ្ទុកមិនត្រឹមត្រូវយូរពេកនាំទៅរកការបំផ្លាញ DNA ហ្សែន។
ការណែនាំ៖ ថង់ទឹកមាត់គួរតែយកគំរូថ្មីៗ ហើយវាមិនត្រូវបានណែនាំឱ្យប្រើ swabs ដែលបានរក្សាទុកសម្រាប់ប្រតិបត្តិការទាញយក DNA ហ្សែនទេ។សំណាកឈាមគួរតែធានាថាគុណភាពមានលក្ខណៈសម្បត្តិគ្រប់គ្រាន់ ហើយរយៈពេលផ្ទុកមិនគួរយូរពេកទេ។
2. ការប្រើប្រាស់ជាលិកាតិចតួចពេកអាចបណ្តាលឱ្យមិនមានការទាញយក DNA ហ្សែនដែលត្រូវគ្នា។
អនុសាសន៍៖ អនុវត្តតាមប៊ូកាl ការណែនាំអំពីសំណាកសំណាកក្នុងសៀវភៅណែនាំប្រតិបត្តិការ ហើយជូតឱ្យបានច្រើនដងតាមដែលអាចធ្វើបានដើម្បីឱ្យកោសិកាគ្រប់គ្រាន់អាចភ្ជាប់ទៅនឹងមាត់ធ្មេញសម្រាប់ការទាញយក DNA ហ្សែន។សម្រាប់ការស្រង់ចេញសំណាកឈាម តំបន់កាត់កន្លែងឈាមអាចត្រូវបានបង្កើនយ៉ាងសមស្រប។
3. Foregene Protease ត្រូវបានរក្សាទុកដោយមិនត្រឹមត្រូវ ដែលជាលទ្ធផលមានការថយចុះនៃសកម្មភាព ឬភាពអសកម្មរបស់វា។
អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់លក្ខខណ្ឌផ្ទុករបស់អេហ្វoregene Protease ឬជំនួសវាដោយ Foregene Protease ថ្មីសម្រាប់ប្រតិកម្មអង់ស៊ីម។
4. ការរក្សាទុកឧបករណ៍មិនត្រឹមត្រូវ ឬរយៈពេលផ្ទុកយូរពេក ដែលនាំឱ្យសមាសធាតុមួយចំនួននៅក្នុងឧបករណ៍មិនដំណើរការ។
អនុសាសន៍៖ ទិញថ្មី។Buccal swab DNAការដាក់ឱ្យនៅដាច់ដោយឡែក កញ្ចប់សម្រាប់នីតិវិធីពាក់ព័ន្ធ។
5. Buffer WB មិនបន្ថែមអេតាណុលដាច់ខាត។
អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់ថាសតិបណ្ដោះអាសន្ន WB បន្ថែមបរិមាណត្រឹមត្រូវនៃអេតាណុលដាច់ខាត។
6. ភាពល្អិតល្អន់មិនត្រូវបានបន្ថែមត្រឹមត្រូវទៅក្នុងខ្សែភាពយន្តស៊ីលីកុនទេ។
អនុសាសន៍: បន្ថែម 65°Cpre-warmed eluent ទម្លាក់ទៅពាក់កណ្តាលនៃភ្នាសស៊ីលីកូន ហើយទុកនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់រយៈពេល 5 នាទី ដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃការបំភាយ។
Lទិន្នផល DNA ហ្សែន ឯកោ
មូលហេតុដែលអាចកើតមានមានដូចខាងក្រោម៖
1. ការរក្សាទុកសំណាក ឬការផ្ទុកមិនត្រឹមត្រូវយូរពេកនាំទៅរកការបំផ្លាញ DNA ហ្សែន។
ការណែនាំ៖ ក្រដាសជូតមាត់ត្រូវបានគេយកជាគំរូថ្មីៗល្អជាង ហើយកន្សែងដែលរក្សាទុកមិនគួរប្រើសម្រាប់ការទាញយក DNA ហ្សែនទេ។
2. ប្រសិនបើបរិមាណនៃសំណាកជាលិកាតូចពេក មាតិកាហ្សែនហ្សែនដែលបានស្រង់ចេញនឹងមានតិចជាង។
ការណែនាំ៖ អនុវត្តតាមការណែនាំអំពីការយកគំរូតាមមាត់នៅក្នុងសៀវភៅណែនាំប្រតិបត្តិការ ដោយជូតឱ្យបានច្រើនដងតាមដែលអាចធ្វើទៅបាន ដើម្បីឱ្យកោសិកាគ្រប់គ្រាន់អាចភ្ជាប់ទៅនឹងមាត់ធ្មេញសម្រាប់ការទាញយក DNA ហ្សែន។
3. Foregene Protease ត្រូវបានរក្សាទុកដោយមិនត្រឹមត្រូវ ដែលជាលទ្ធផលមានការថយចុះនៃសកម្មភាព ឬភាពអសកម្មរបស់វា។
អនុសាសន៍៖ បញ្ជាក់លក្ខខណ្ឌផ្ទុករបស់the Foregene Protease ឬជំនួសវាដោយថ្មី។ Foregene Protease សម្រាប់ប្រតិកម្មអង់ស៊ីម។
4. បញ្ហាដែលពូកែ។
ការណែនាំ៖ ប្រើ Buffer EB សម្រាប់ elution;ប្រសិនបើប្រើ ddH2O ឬ eluents ផ្សេងទៀត បញ្ជាក់ថា pH នៃ eluate ស្ថិតនៅចន្លោះ 7.0-8.5 ។
5. eluate មិនត្រូវបានបន្ថែមត្រឹមត្រូវ dropwise ។
ការណែនាំ៖ បន្ថែមដំណក់ទឹកទៅកណ្តាលនៃភ្នាសស៊ីលីកុន ហើយទុកនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់រយៈពេល 5 នាទី ដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃការបញ្ចេញពន្លឺ។
6. សារធាតុរាវ elution កកកុញតិចពេក។
ការណែនាំ៖ ប្រើ eluent សម្រាប់ការ elution DNA ហ្សែន តាមតម្រូវការក្នុងការណែនាំ យ៉ាងហោចណាស់មិនតិច ជាង 15μl.
Lអូ ភាពបរិសុទ្ធ of DNA ហ្សែនឯកោ
ភាពបរិសុទ្ធ DNA ហ្សែនទាបអាចនាំទៅរកការបរាជ័យ ឬលទ្ធផលមិនពេញចិត្តនៃការពិសោធន៍ខាងក្រោម ដូចជា៖ អង់ស៊ីមមិនអាចកាត់ចេញបានទេ PCR មិនអាចទទួលបានបំណែកហ្សែនដែលចាប់អារម្មណ៍។ល។
មូលហេតុដែលអាចកើតមានមានដូចខាងក្រោម៖
1. ការបំពុល Heteroprotein ការបំពុល RNA ។
ការវិភាគ៖ ជួរឈរបន្សុតមិនត្រូវបានលាងសម្អាតដោយប្រើ Buffer PW;ជួរឈរលាងសម្អាត Buffer PW មិនត្រូវបានលាងសម្អាតដោយប្រើល្បឿន centrifugal ត្រឹមត្រូវ។
អនុសាសន៍៖ ត្រូវប្រាកដថាមិនមានទឹកភ្លៀងនៅក្នុង supernatant មុនពេលបន្ថែមអេតាណុល។ត្រូវប្រាកដថាលាងសម្អាតជួរឈរបន្សុតតាមការណែនាំ ហើយជំហាននេះមិនអាចលុបចោលបានទេ។
2. ការបំពុលអ៊ីយ៉ុងមិនបរិសុទ្ធ។
ការវិភាគ៖ ជួរឈរលាងសម្អាត Buffer WB ត្រូវបានលុបចោល ឬលាងសម្អាតតែម្តងគត់ ដែលបណ្តាលឱ្យមានការចម្លងរោគអ៊ីយ៉ុងដែលនៅសេសសល់។
ការណែនាំ៖ ត្រូវប្រាកដថាត្រូវលាងសម្អាត Buffer WB 2 ដងតាមការណែនាំ ដើម្បីលុបអ៊ីយ៉ុងដែលនៅសេសសល់តាមដែលអាចធ្វើទៅបាន។
3. ការចម្លងរោគអង់ស៊ីម RNA ។
ការវិភាគ៖ RNases បរទេសត្រូវបានបន្ថែមទៅសតិបណ្ដោះអាសន្ន។ប្រតិបត្តិការលាងសម្អាត Buffer PW មិនត្រឹមត្រូវ ដែលបណ្តាលឱ្យមានសំណល់ RNase ប៉ះពាល់ដល់ប្រតិបត្តិការពិសោធន៍ RNA ខាងក្រោម ដូចជាការចម្លងនៅក្នុង vitro ជាដើម។
អនុសាសន៍៖ អាស៊ីត nucleic ស៊េរី Foregeneអ៊ីសូឡាឧបករណ៍ tion អាចយក RNA ចេញដោយមិនចាំបាច់បន្ថែម RNase,ដូច្នេះ កញ្ចប់ឌីអិនអេ កាត buccal Swab/FTA ដាច់ដោយឡែកត្រូវការ't បន្ថែម RNase;ត្រូវប្រាកដថាធ្វើតាមការណែនាំសម្រាប់ជួរឈរសម្អាត Buffer PW ហើយជំហាននេះមិនអាចលុបចោលបានទេ។
4. សំណល់អេតាណុល។
ការវិភាគ៖ Buffer WB មិនបានធ្វើការ centrifugation បំពង់ទទេទេ បន្ទាប់ពីលាងសម្អាតជួរឈរបន្សុត។
អនុសាសន៍: អនុវត្តប្រតិបត្តិការ centrifugation បំពង់ទទេត្រឹមត្រូវតាមការណែនាំ។
5. ការបំពុលមិនបរិសុទ្ធផ្សេងទៀត។
ការវិភាគ៖ សំណាកដែលបានរក្សាទុក ឬសំណាកពិសេសមិនត្រូវបានព្យាបាលជាមុនទេ។
អនុសាសន៍៖ រៀបចំគំរូឱ្យបានហ្មត់ចត់តាមការណែនាំ។
ពេលវេលាប្រកាស៖ ថ្ងៃទី ១៨-២០២២ ខែមីនា
