Direct PCR គឺជាប្រតិកម្មដែលប្រើដោយផ្ទាល់នូវជាលិកាសត្វ ឬរុក្ខជាតិសម្រាប់ការពង្រីកដោយគ្មានការទាញយកអាស៊ីត nucleic ។នៅក្នុងវិធីជាច្រើន PCR ផ្ទាល់ដំណើរការដូច PCR ធម្មតា។

ភាពខុសគ្នាសំខាន់គឺសតិបណ្ដោះអាសន្នផ្ទាល់ខ្លួនដែលប្រើក្នុង PCR ផ្ទាល់ គំរូអាចត្រូវបានទទួលរងដោយផ្ទាល់ទៅនឹងប្រតិកម្ម PCR ដោយគ្មានការទាញយកអាស៊ីត nucleic ប៉ុន្តែមានតម្រូវការដែលត្រូវគ្នាសម្រាប់ការអត់ធ្មត់នៃអង់ស៊ីមនិងភាពឆបគ្នានៃសតិបណ្ដោះអាសន្នដែលពាក់ព័ន្ធនឹងប្រតិកម្ម PCR ផ្ទាល់។

ទោះបីជាមាន PCR inhibitors ច្រើនឬតិចនៅក្នុងគំរូទូទៅក៏ដោយ PCR ផ្ទាល់នៅតែអាចសម្រេចបាននូវការពង្រីកដែលអាចទុកចិត្តបានក្រោមសកម្មភាពនៃអង់ស៊ីម និងសារធាតុបណ្ដោះអាសន្ន។ប្រតិកម្ម PCR ប្រពៃណីទាមទារអាស៊ីត nucleic ដែលមានគុណភាពខ្ពស់ជាគំរូ ដែលអាចរារាំងដំណើរការរលូននៃប្រតិកម្ម PCR ប្រសិនបើគំរូមានប្រូតេអ៊ីន និងសារធាតុមិនបរិសុទ្ធផ្សេងទៀត។Direct PCR បច្ចុប្បន្នគឺជាបច្ចេកវិទ្យាដ៏ពេញនិយមមួយក្នុងវិស័យវិភាគម៉ូលេគុល។

01 Direct PCR ត្រូវបានប្រើប្រាស់ដំបូងសម្រាប់សត្វ និងរុក្ខជាតិ

កម្មវិធីដំបូងបំផុតនៃ PCR ផ្ទាល់គឺនៅក្នុងវិស័យសត្វ និងរុក្ខជាតិ ដូចជាឈាម ជាលិកា និងរោមរបស់កណ្តុរ ឆ្មា មាន់ ទន្សាយ ចៀម គោក្របី ជាដើម ស្លឹករុក្ខជាតិ និងគ្រាប់ពូជជាដើម ប្រើដើម្បីសិក្សាអំពីហ្សែន ការប្តូរហ្សែន ការរកឃើញប្លាស្មា ការវិភាគហ្សែន ការវិភាគប្រភព DNA ការកំណត់ប្រភេទផ្សេងៗ និងវាល SNP ។

វាលទាំងនេះមានលក្ខណៈទូទៅមួយចំនួន ពោលគឺមាតិកាហ្សែនគោលដៅគឺខ្ពស់ ហើយការទាញយកអាស៊ីត nucleic គឺមានបញ្ហា ដូច្នេះ PCR ផ្ទាល់មិនត្រឹមតែអាចសន្សំសំចៃពេលវេលា និងមានឥទ្ធិពលតិចតួចលើលទ្ធផលប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែថែមទាំងសន្សំសំចៃថ្លៃដើមទៀតផង។

PCR ផ្ទាល់ដែលត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការរកឃើញមេរោគគឺជាបញ្ហានៃប៉ុន្មានឆ្នាំថ្មីៗនេះក្រុមហ៊ុនផលិតថ្នាំ PCR មួយចំនួនបានខិតខំប្រឹងប្រែងជាច្រើនក្នុងទិសដៅនេះនៅពេលបង្កើតការច្នៃប្រឌិត។ជាពិសេសនៅក្នុងការរីករាលដាលនៃ COVID-19 នេះ ផលិតផលរាវរកបែបនេះជាច្រើនបានបង្ហាញខ្លួននៅលើទីផ្សារ ដូចជា SARS-CoV-2 Nucleic Acid Detection Kit (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) ដែលស្រាវជ្រាវ និងអភិវឌ្ឍដោយ Foregene ដែលប្រើប្រាស់បច្ចេកវិទ្យា RT PCR ពេលវេលាពិត (rRT-PCR) សម្រាប់ការរកឃើញគុណភាពនៃ SARS-CoVsongsary acide 2 របស់មនុស្ស។ .

Foregene គឺជាក្រុមហ៊ុនមួយក្នុងចំណោមក្រុមហ៊ុនដែលប្រើបច្ចេកវិទ្យា Direct PCR សម្រាប់ការរកឃើញ ORF1ab ធម្មតា N, E និងវ៉ារ្យ៉ង់ អំបូរអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកនៅក្នុងសំណាកប្រហោងច្រមុះរបស់មនុស្ស ឬ oropharyngeal swab ដូចជា SARS-CoV-2 B.1.1.7 lineage (UK), B.1.351 lineage (ZA), B.1.617 lineage (IND) និង P.1 lineage (BR)។

02  ភ្នាក់ងារត្រូវការសម្រាប់ PCR ផ្ទាល់

លីសាតគំរូ

lysate គំរូអាចត្រូវបានកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធដោយខ្លួនឯងឬទិញ។ភាពខុសគ្នានៃសមាសភាពនៃម៉ាកផ្សេងៗគ្នានៃ lysate នឹងធ្វើឱ្យសមត្ថភាព lysing ខុសគ្នា ហើយបន្ទាប់មកពេលវេលា lysing នឹងខុសគ្នាបន្តិច។ឧទាហរណ៍ សម្រាប់ការរៀបចំសំណាកជាលិកាសត្វ ជាទូទៅ 30 នាទី ឬ លីហ្សីស ពេញមួយយប់ ត្រូវបានណែនាំ ហើយដំណោះស្រាយលីសសម្រាប់មេរោគមានចាប់ពី 3 ទៅ 10 នាទី។

ល្បាយមេ PCR

វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យប្រើ hot-start DNA polymerase ដើម្បីបង្កើនការពង្រីកជាក់លាក់ និងបង្កើនសមត្ថភាពពង្រីក។ស្នូលនៃ PCR ផ្ទាល់គឺជាវត្ថុធាតុ polymerase ដែលអត់ធ្មត់ខ្ពស់។

លុបបំបាត់ ឬរារាំងសមាសធាតុនៅក្នុងគំរូដែលប៉ះពាល់ដល់ការពង្រីក DNA

បន្ទាប់ពីគំរូត្រូវបានដំណើរការជាមួយ lysate ប្រូតេអ៊ីន lipid និងកំទេចកំទីកោសិកាផ្សេងទៀតនឹងត្រូវបានបញ្ចេញ សារធាតុទាំងនេះនឹងរារាំងប្រតិកម្ម PCR ។ដូច្នេះ PCR ដោយផ្ទាល់តម្រូវឱ្យមានការបន្ថែមនៃការដកយកចេញដែលត្រូវគ្នាឬ inhibitors ដើម្បីកាត់បន្ថយឥទ្ធិពលនៃកត្តាទាំងនេះ។

03  បណ្តុំនៃចំណុចចំណេះដឹងចំនួនប្រាំនៃ PCR ផ្ទាល់

ទីមួយ បច្ចេកវិទ្យា Direct PCR គឺជាបច្ចេកវិទ្យា PCR ផ្ទាល់សម្រាប់គំរូជីវសាស្រ្តផ្សេងៗ។នៅក្រោមលក្ខខណ្ឌបច្ចេកទេសនេះ មិនចាំបាច់បំបែក និងស្រង់ចេញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកទេ ប្រើដោយផ្ទាល់នូវគំរូជាលិកាជាវត្ថុ ហើយបន្ថែមហ្សែនគោលដៅគឺដើម្បីអនុវត្តប្រតិកម្ម PCR ។

ទីពីរ បច្ចេកវិទ្យា Direct PCR មិនត្រឹមតែជាបច្ចេកវិជ្ជាពង្រីកគំរូ DNA ប្រពៃណីប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែថែមទាំងរួមបញ្ចូលគំរូ RNA បញ្ច្រាស PCR ផងដែរ។

ទីបី បច្ចេកវិទ្យា Direct PCR មិនត្រឹមតែអនុវត្តដោយផ្ទាល់នូវប្រតិកម្ម PCR ប្រកបដោយគុណភាពជាប្រចាំនៅលើគំរូជាលិកាប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែថែមទាំងរួមបញ្ចូលប្រតិកម្ម qPCR ពេលវេលាពិត ដែលតម្រូវឱ្យប្រព័ន្ធប្រតិកម្មមានសមត្ថភាពជ្រៀតជ្រែក fluorescence ប្រឆាំងនឹងផ្ទៃខាងក្រោយដ៏រឹងមាំ និង fluorescence endogenous ពន្លត់សមត្ថភាពប្រឆាំង។

ទីបួន សំណាកដែលកំណត់គោលដៅដោយបច្ចេកវិទ្យា Direct PCR ត្រូវការតែការបញ្ចេញគំរូអាស៊ីត nucleic ប៉ុណ្ណោះ និងមិនដកប្រូតេអ៊ីន ប៉ូលីស្យូស អ៊ីយ៉ុងអំបិល ជាដើម ដែលរំខានដល់ប្រតិកម្ម PCR ។ដែលតម្រូវឱ្យអាស៊ីត nucleic polymerase និង PCR Mix នៅក្នុងប្រព័ន្ធប្រតិកម្មមានភាពធន់ទ្រាំ និងសម្របខ្លួនបានល្អ ដើម្បីធានាបាននូវសកម្មភាពអង់ស៊ីម និងភាពត្រឹមត្រូវនៃការចម្លងក្រោមលក្ខខណ្ឌស្មុគស្មាញ។

ទីប្រាំ គំរូជាលិកាដែលកំណត់គោលដៅដោយបច្ចេកវិទ្យា Direct PCR ដោយគ្មានការព្យាបាលបន្ថែមអាស៊ីត nucleic ហើយបរិមាណនៃគំរូគឺតូចណាស់ ដែលទាមទារឱ្យប្រព័ន្ធប្រតិកម្មមានភាពប្រែប្រួលខ្ពស់ និងប្រសិទ្ធភាពពង្រីក។