ខ្ញុំជឿថាមនុស្សគ្រប់គ្នានឹងតែងតែជួបប្រទះបញ្ហាបែបនេះឬបែបនេះនៅពេលធ្វើប្រតិកម្ម PCR ប៉ុន្តែភាគច្រើននៃពួកគេអាចត្រូវបានបែងចែកជាពីរបញ្ហាចម្បង:

ការពង្រីកតិចតួចពេកនៃគំរូហ្សែន (ការពង្រីក);
ការពង្រីកហ្សែនមិនគោលដៅច្រើនពេក។
ការប្រើប្រាស់សារធាតុបន្ថែមគឺជាយុទ្ធសាស្ត្រទូទៅមួយក្នុងការដោះស្រាយបញ្ហាទាំងនេះ។ជាធម្មតាតួនាទីនៃសារធាតុបន្ថែមមានទិដ្ឋភាពពីរ៖
រចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំហ្សែន (រចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំ);
កាត់បន្ថយការលាបថ្នាំដែលមិនជាក់លាក់។
ថ្ងៃនេះ កម្មវិធីនិពន្ធនឹងណែនាំអ្នកដោយសង្ខេបអំពីសារធាតុបន្ថែមទូទៅនៅក្នុងប្រតិកម្ម PCR និងមុខងាររបស់វា។
សារធាតុបន្ថែមដែលកាត់បន្ថយរចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំ
ស៊ុលអុកស៊ីត(DMSO)
គំរូហ្សែនជាមួយនឹងមាតិកា GC ខ្ពស់។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ DMSO ក៏កាត់បន្ថយសកម្មភាព Taq polymerase យ៉ាងខ្លាំងផងដែរ។ដូច្នេះហើយ អ្នកគ្រប់គ្នាត្រូវថ្លឹងថ្លែងនូវលទ្ធភាពប្រើប្រាស់គំរូ និងសកម្មភាពរបស់ប៉ូលីមែរ។កម្មវិធីនិពន្ធណែនាំថា អ្នកអាចសាកល្បងកំហាប់ផ្សេងៗនៃ DSMO ដូចជាពី 2% ទៅ 10% ដើម្បីស្វែងរកកំហាប់ដែលសាកសមនឹងការពិសោធន៍របស់អ្នក។
សារធាតុសាប៊ូដែលមិនមានអ៊ីយ៉ូដ
សារធាតុសាប៊ូដែលមិនមែនជាអ៊ីយ៉ុង ដូចជា 0.1-1% Triton X-100, Tween 20 ឬ NP-40 ជាធម្មតាកាត់បន្ថយរចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំ DNA ។ទោះបីជានេះអាចបង្កើនការពង្រីកនៃហ្សែនគំរូក៏ដោយ វាក៏នឹងបណ្តាលឱ្យមានបញ្ហានៃការពង្រីកមិនជាក់លាក់ផងដែរ។ដូច្នេះសារធាតុបន្ថែមទាំងនេះដំណើរការល្អសម្រាប់ប្រតិកម្ម PCR ទិន្នផលទាបដោយគ្មានកំទេចកំទី ប៉ុន្តែមិនល្អសម្រាប់ប្រតិកម្ម PRC ដែលមិនបរិសុទ្ធ។អត្ថប្រយោជន៍មួយទៀតនៃសារធាតុសាប៊ូដែលមិនមានអ៊ីយ៉ូដគឺការកាត់បន្ថយការចម្លងរោគ SDS ។ជាធម្មតាក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការទាញយក DNA នោះ SDS នឹងត្រូវបាននាំយកទៅជំហាន PCR ដែលរារាំងសកម្មភាពរបស់សារធាតុប៉ូលីមេរ៉ាសយ៉ាងខ្លាំង។ដូច្នេះការបន្ថែម 0.5% Tween-20 ឬ Tween-40 ទៅនឹងប្រតិកម្មអាចបន្សាបឥទ្ធិពលអវិជ្ជមានរបស់ SDS ។
បេតាន_
Betaine អាចធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវការពង្រីក DNA ដោយកាត់បន្ថយការបង្កើតរចនាសម្ព័ន្ធបន្ទាប់បន្សំ ហើយជាទូទៅគឺជាការបន្ថែម "អាថ៌កំបាំង" ទៅលើឧបករណ៍ PCR ពាណិជ្ជកម្ម។ប្រសិនបើអ្នកចង់ប្រើ betaine អ្នកគួរតែដាក់ betaine ឬ betaine mono-hydrate (Betaine ឬ Betaine mono-hydrate) ប៉ុន្តែមិនមែន betaine hydrochloride (Betaine HCl) ទេ លៃតម្រូវទៅកំហាប់ចុងក្រោយនៃ 1-1.7M ។Betaine ក៏អាចជួយកែលម្អភាពជាក់លាក់ផងដែរព្រោះវាលុបបំបាត់ការពឹងផ្អែកនៃសមាសភាពគូមូលដ្ឋាននៃការរលាយ DNA/DNA denaturation ។
សារធាតុបន្ថែមដើម្បីកាត់បន្ថយការ priming មិនជាក់លាក់
ហ្វមម៉ាមីត
Formamide គឺជាសារធាតុបន្ថែម PCR សរីរាង្គដែលប្រើជាទូទៅ។វាអាចផ្សំជាមួយនឹងចង្អូរធំ និងចង្អូរតូចនៅក្នុង DNA ដោយហេតុនេះកាត់បន្ថយស្ថេរភាពនៃមេគុណ DNA ទ្វេដង និងបន្ថយសីតុណ្ហភាពរលាយនៃ DNA ។កំហាប់នៃ formamide ដែលប្រើក្នុងការពិសោធន៍ PCR ជាធម្មតាគឺ 1%-5%។
តេត្រាមេទីល។អាម៉ូញ៉ូមក្លរីត( TMAC)
Tetramethylammonium chloride អាចបង្កើនភាពជាក់លាក់នៃការបង្កាត់ (ភាពជាក់លាក់នៃការបង្កាត់) និងបង្កើនសីតុណ្ហភាពរលាយនៃ DNA ។ដូច្នេះ TMAC អាច​កម្ចាត់​មុន​មិន​ជាក់លាក់ និង​កាត់បន្ថយ​ការ​ចង DNA និង RNA ខុស។ប្រសិនបើអ្នកប្រើdegenerate primersនៅក្នុងប្រតិកម្ម PCR កុំភ្លេចបន្ថែម TMAC ដែលត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅនៅកំហាប់ 15-100mM ។
សារធាតុបន្ថែមទូទៅផ្សេងទៀត។
បន្ថែមពីលើប្រភេទសារធាតុបន្ថែមពីរប្រភេទដែលបានរៀបរាប់ខាងលើ មានសារធាតុបន្ថែមទូទៅជាច្រើននៅក្នុងប្រតិកម្ម PCR ទោះបីជាវាមានមុខងារផ្សេងគ្នាក៏ដោយ ក៏វាមានសារៈសំខាន់ខ្លាំងផងដែរ។
ម៉ាញ៉េស្យូមអ៊ីយ៉ុង
ម៉ាញ៉េស្យូមអ៊ីយ៉ុងគឺជា cofactor (cofactor) ដែលមិនអាចខ្វះបាននៃវត្ថុធាតុ polymerase ដែលមានន័យថាដោយគ្មានអ៊ីយ៉ុងម៉ាញ៉េស្យូម polymerase គឺអសកម្ម។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ អ៊ីយ៉ុងម៉ាញេស្យូមច្រើនពេកក៏អាចប៉ះពាល់ដល់ប្រសិទ្ធភាពនៃសារធាតុប៉ូលីមេរ៉ាសដែរ។កំហាប់នៃអ៊ីយ៉ុងម៉ាញ៉េស្យូមនៅក្នុងប្រតិកម្ម PCR នីមួយៗនឹងប្រែប្រួល។ភ្នាក់ងារ Chelating (ដូចជា EDTA ឬ citrate) ការប្រមូលផ្តុំនៃ dNTPs និងប្រូតេអ៊ីនទាំងអស់ប៉ះពាល់ដល់ការប្រមូលផ្តុំនៃអ៊ីយ៉ុងម៉ាញ៉េស្យូម។ដូច្នេះ ប្រសិនបើអ្នកមានបញ្ហាជាមួយនឹងការពិសោធន៍ PCR របស់អ្នក អ្នកអាចព្យាយាមផ្លាស់ប្តូរកំហាប់អ៊ីយ៉ុងម៉ាញេស្យូមផ្សេងៗគ្នា ឧទាហរណ៍ពី 1.0 ទៅ 4.0mM ជាមួយនឹងចន្លោះពេល 0.5-1mM នៅចន្លោះ។
វាគួរឱ្យកត់សម្គាល់ថាវដ្តនៃការកកច្រើនអាចនាំឱ្យមានការប្រមូលផ្តុំកម្រិតនៃដំណោះស្រាយម៉ាញ៉េស្យូមក្លរួ។ដូច្នេះហើយ អ្នកត្រូវរំលាយវាឱ្យអស់មុនពេលប្រើប្រាស់នីមួយៗ ហើយលាយវាឱ្យល្អមុនពេលប្រើប្រាស់។
អាល់ប៊ុមប៊ីនសេរ៉ូម(Bovine albumin, BSA)
នៅក្នុងការពិសោធន៍គីមីវិទ្យាម៉ូលេគុល អាល់ប៊ុយមីនសេរ៉ូម bovine គឺជាសារធាតុបន្ថែមទូទៅ ជាពិសេសនៅក្នុងការរឹតបន្តឹងការរំលាយអាហារអង់ស៊ីម និងការពិសោធន៍ PCR ។នៅក្នុងប្រតិកម្ម PCR BSA មានប្រយោជន៍ក្នុងការកាត់បន្ថយភាពកខ្វក់ដូចជាសមាសធាតុ phenolic ។ហើយ​គេ​ក៏​បាន​និយាយ​ថា​វា​អាច​កាត់​បន្ថយ​ការ​ស្អិត​របស់​សារធាតុ​ប្រតិកម្ម​ទៅ​នឹង​ជញ្ជាំង​បំពង់​សាកល្បង។នៅក្នុងប្រតិកម្ម PCR ជាធម្មតាកំហាប់នៃ BSA ដែលបានបន្ថែមអាចឈានដល់ 0.8 mg/ml ។
 
ផលិតផលដែលពាក់ព័ន្ធ៖
វីរបុរស PCR(ជាមួយថ្នាំពណ៌)
វីរបុរស PCR