• ហ្វេសប៊ុក
  • តំណភ្ជាប់
  • យូធូប

ការផ្ទៀងផ្ទាត់ការអនុវត្តនៃ primers និង probes នៅក្នុងដំណាក់កាលដំបូងនៃ reagents PCR និងការកំណត់លក្ខខណ្ឌប្រតិកម្មសមស្របបំផុតគឺជាតម្រូវការជាមុនដើម្បីធានាបាននូវដំណើរការរលូននៃការពិសោធន៍ផ្លូវការ។

ដូច្នេះតើយើងត្រូវធ្វើដូចម្តេចដើម្បីបញ្ជាក់ការស៊ើបអង្កេតបឋមនៅដំណាក់កាលដំបូង?

សូចនាករសំខាន់ៗគឺ បន្ទាត់មូលដ្ឋាន ខ្សែកោង amplification តម្លៃ ct ប្រសិទ្ធភាព amplification ការរកឃើញគំរូកំហាប់ទាប CV ។ល។

បន្ទាត់មូលដ្ឋាន

បន្ទាត់មូលដ្ឋានគឺជាបន្ទាត់ផ្តេកនៅក្នុងខ្សែកោងពង្រីក PCR ។នៅក្នុងវដ្តពីរបីដំបូងនៃប្រតិកម្ម PCR amplification សញ្ញា fluorescence មិនផ្លាស់ប្តូរច្រើនទេ ហើយបង្កើតជាបន្ទាត់ត្រង់។បន្ទាត់ត្រង់នេះគឺជាបន្ទាត់មូលដ្ឋាន។

នៅពេលពិនិត្យ PCR primer probes សូមយកចិត្តទុកដាក់ថាតើកម្រិតមូលដ្ឋានគឺកម្រិត។ភាពបរិសុទ្ធនៃកំហាប់ primer probe នឹងប៉ះពាល់ដល់បន្ទាត់គោល ដូចជាធ្វើឱ្យបន្ទាត់គោលកើនឡើង ឬធ្លាក់ចុះ។បន្ទាត់មូលដ្ឋានក៏ជាសូចនាករវិចារណញាណផងដែរ។
ការវិភាគ

ខ្សែកោងពង្រីក

សូចនាករវិចារណញាណមួយទៀតគឺរូបរាងនៃខ្សែកោង amplification ។វាជាការល្អបំផុតដែលមានខ្សែកោងរាងអក្សរ S ដើម្បីជៀសវាងការពង្រីកបន្ទាប់បន្សំ ឬខ្សែកោងពង្រីកមិនធម្មតាផ្សេងទៀត។
មោឃៈ

តម្លៃ Ct

ចំនួនវដ្ដដែលត្រូវគ្នានឹងចំនុចបញ្ឆេះពីបន្ទាត់គោលរហូតដល់កំណើនអិចស្ប៉ូណង់ស្យែលគឺជាតម្លៃ Ct ។

សម្រាប់គំរូដូចគ្នា ការស៊ើបអង្កេតបឋមផ្សេងគ្នានាំឱ្យខ្សែកោង amplification ផ្សេងគ្នា ហើយតម្លៃ Ct ដែលត្រូវគ្នានឹងរងផលប៉ះពាល់ដោយប្រសិទ្ធភាព amplification និងកម្រិតរំខាន។តាមទ្រឹស្តី តម្លៃ Ct តូចជាងនៃការស៊ើបអង្កេតបឋមដែលយើងជ្រើសរើស កាន់តែប្រសើរ។

ការវិភាគ-៣

ប្រសិទ្ធភាពពង្រីក

វិធីសាស្រ្តមួយក្នុងចំណោមវិធីសាស្រ្តដែលអាចទុកចិត្តបាននិងមានស្ថេរភាពបំផុតសម្រាប់ការវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាពពង្រីក PCR គឺខ្សែកោងស្តង់ដារ ដែលត្រូវបានទទួលស្គាល់យ៉ាងទូលំទូលាយដោយអ្នកស្រាវជ្រាវផងដែរ។វិធីសាស្រ្តពាក់ព័ន្ធនឹងការបង្កើតគំរូជាបន្តបន្ទាប់ ដើម្បីគ្រប់គ្រងចំនួនគំរូគោលដៅដែលទាក់ទង។សំណាកទាំងនេះជាធម្មតាត្រូវបានធ្វើឡើងដោយការរំលាយសៀរៀលនៃដំណោះស្រាយស្តុកប្រមូលផ្តុំ ដែលត្រូវបានគេប្រើញឹកញាប់បំផុតគឺការរំលាយ 10 ដង។ដោយប្រើស៊េរីនៃសំណាកដែលពនរ ដោយប្រើកម្មវិធី qPCR ស្តង់ដារដើម្បីពង្រីកដើម្បីទទួលបានតម្លៃ Cq ហើយចុងក្រោយគូរខ្សែកោងស្តង់ដារមួយយោងទៅតាមការប្រមូលផ្តុំនៃគំរូនីមួយៗ និងតម្លៃ Cq ដែលត្រូវគ្នាដើម្បីទទួលបានសមីការលីនេអ៊ែរ Cq= -klgX0+b និងប្រសិទ្ធភាព amplification E=10(-1 /k)-1 ។នៅពេលប្រើ qPCR សម្រាប់ការវិភាគបរិមាណ ប្រសិទ្ធភាពនៃការពង្រីកគឺតម្រូវឱ្យស្ថិតនៅក្នុងចន្លោះ 90%-110% (3.6>k>3.1)។

ការវិភាគ-៤

ការរកឃើញគំរូកំហាប់ទាប

នៅពេលដែលកំហាប់គំរូមានកម្រិតទាប អត្រារកឃើញនៃការស៊ើបអង្កេតបឋមខុសគ្នា។យើងជ្រើសរើសគំរូដែលមានកំហាប់ទាបចំនួន 20 ដើម្បីចម្លង ហើយប្រព័ន្ធ primer-probe ដែលមានអត្រារកឃើញខ្ពស់បំផុតគឺល្អបំផុត។

ការវិភាគ-៥

មេគុណបំរែបំរួល (CV)

គំរូស្ទួនចំនួន 10 អាចត្រូវបានរកឃើញជាមួយនឹងការស៊ើបអង្កេតបឋមផ្សេងៗគ្នា យោងទៅតាមស្តង់ដារបន្ទាត់នៃ reagent សម្រាប់ការរកឃើញ amplification អាស៊ីត nucleic ។

ការវិភាគ-៦

ប្រតិកម្មបរិមាណ៖
ភាព​ត្រឹមត្រូវ
ភាពត្រឹមត្រូវក្នុងមួយបាច់គួរតែជួប៖ មេគុណបំរែបំរួល (CV,%) នៃតម្លៃលោការីតនៃការផ្តោតអារម្មណ៍តេស្តគឺ ≤5% ។នៅពេលដែលកំហាប់គំរូមានកម្រិតទាប មេគុណនៃបំរែបំរួល (CV,%) នៃលោការីតនៃកំហាប់រាវរកគឺ ≤10%


សារធាតុ​ដែល​មាន​គុណភាព៖
ភាព​ត្រឹមត្រូវ
ភាពត្រឹមត្រូវក្នុងមួយបាច់គួរតែជួប៖

(1) មេគុណបំរែបំរួលនៃតម្លៃ Ct (CV,%) ≤5%

គំរូដូចគ្នាត្រូវបានធ្វើតេស្តស្របគ្នាចំនួន 10 ដង ហើយលទ្ធផលតេស្តគួរតែស្របគ្នា។


ពេលវេលាប្រកាស៖ ថ្ងៃទី ១៨-២០-២០២១