អ្នកនិពន្ធ៖ Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

អង្គភាព៖ មន្ទីរពេទ្យ Jiaozhou, មន្ទីរពេទ្យ Dongfang ដែលជាប់ទាក់ទងនឹងសាកលវិទ្យាល័យ Tongji

នាពេលបច្ចុប្បន្ននេះ ប្រភេទសំណាកសំខាន់សម្រាប់ការរកឃើញអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកនៃភ្នាក់ងារបង្ករោគក្នុងផ្លូវដង្ហើមគឺបំពង់ក។មានដំណោះស្រាយថែរក្សាសំណាកគំរូជាច្រើនប្រភេទដែលប្រើជាទូទៅ ដែលទាំងអស់ត្រូវដាក់ក្នុងទូរទឹកកក ឬកកសម្រាប់ការដឹកជញ្ជូន និងការផ្ទុក។វាពិបាកក្នុងការគ្រប់គ្រងដំណើរការទាំងមូលនៃសីតុណ្ហភាពទាបក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការប្រមូល និងដឹកជញ្ជូន ហើយវាពិបាកក្នុងការធានានូវការត្រួតពិនិត្យគុណភាពមុនពេលធ្វើតេស្តគំរូ។^[1-2].

RNase (RNase) គឺជា endonuclease ដែល hydrolyzes RNA ជាចម្បងបំបែកចំណង phosphodiester រវាង nucleotides ។ម៉ូលេគុល RNase មានស្ថេរភាពខ្លាំង មានចំណង disulfide នៅក្នុងរចនាសម្ព័ន្ធ ហើយសកម្មភាពរបស់វាមិនតម្រូវឱ្យមានវត្តមានរបស់ divalent cations ដូច្នេះ RNase មិនងាយប្រែពណ៌ទេ ហើយវាងាយស្រួលក្នុងការបង្កើតឡើងវិញ ទោះបីជាបន្ទាប់ពីសីតុណ្ហភាពខ្ពស់ ឬការប្រើប្រាស់សារធាតុ denaturants ក៏ដោយ។RNases ត្រូវបានបែងចែកទៅជា endogenous និង exogenous ។RNases endogenous អាច​ត្រូវ​បាន​បញ្ចេញ​នៅ​ពេល​ជាមួយ​គ្នា​នៅ​ពេល​ដែល​កោសិកា​ត្រូវ​បាន​បំបែក​។ដូច្នេះហើយ ការលុបបំបាត់តួនាទីរបស់ RNases endogenous គឺជាជំហានដ៏សំខាន់មួយនៅក្នុងដំណើរការទាញយក RNA ។Exogenous RNases ត្រូវបានចែកចាយយ៉ាងទូលំទូលាយ។RNases មាននៅក្នុងខ្យល់ ស្បែកមនុស្ស សក់ និងទឹកមាត់ ដែលជាហេតុផលសំខាន់សម្រាប់ការបំផ្លាញ RNA យ៉ាងងាយស្រួល។^[3].

សំណួរទិន្នន័យ

CANS-CL02-A009 "ការដាក់ពាក្យសុំគុណភាពនៃមន្ទីរពិសោធន៍វេជ្ជសាស្រ្ត និងគោលការណ៍ណែនាំស្តីពីការទទួលស្គាល់សមត្ថភាពក្នុងវិស័យរោគវិនិច្ឆ័យម៉ូលេគុល" នៅក្នុងលក្ខខណ្ឌបច្ចេកទេសស្នើថា ស្តង់ដារគុណភាពទឹកដែលសមស្របគួរតែត្រូវបានបង្កើតស្របតាមកម្មវិធី។ធុងខ្យល់ដែលអាចចោលបាន៖

RNase/ការចាត់ថ្នាក់

(1) RNase A

Ribonuclease A (RNase A) ដែលកើតចេញពីលំពែង bovine គឺជា endoribonuclease ដែលអាចវាយប្រហារជាពិសេសទៅលើ 3′ នៃសំណល់ pyrimidine នៅលើ RNA កាត់ cytosine ឬ uracil ដែលបង្កើតឡើងដោយ nucleotides ជាប់គ្នា។ចំណង Phosphodiester ផលិតផលចុងក្រោយនៃប្រតិកម្មគឺ 3′ pyrimidine nucleotide និង oligonucleotide ដែលមាន 3′ pyrimidine nucleotide នៅចុងបញ្ចប់។

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) មានប្រភពមកពី Aspergillus orjzae វាដើរតួយ៉ាងពិសេសលើផូស្វ័រ 3′ នៃ guanine ហើយកន្លែងបំបែកគឺនៅចន្លោះ 3′ phosphate នៃ guanine និង 5′ hydroxyl នៃ nucleotides ដែលនៅជាប់គ្នា។ផលិតផលចុងក្រោយនៃប្រតិកម្មគឺ 3′អាស៊ីត guanylic និងបំណែក oligonucleotide ជាមួយនឹងអាស៊ីត 3′ guanylic នៅចុងបញ្ចប់។

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) ត្រូវបានរកឃើញដំបូងពីជាលិកា thymus កំភួនជើង ហើយហ្សែននៃការអ៊ិនកូដរបស់វាត្រូវបានក្លូនទៅជា Escherichia coli ។វាអាចបន្សាប DNA យ៉ាងជាក់លាក់៖ ខ្សែ RNA នៅក្នុងកូនកាត់ RNA duplexes ដែលបណ្តាលឱ្យមាន oligonucleotides និង mononucleotides បញ្ចប់ដោយ 3′-OH និង 5′-monophosphate វាមិនអាចបំផ្លាញ DNA ឬ RNA តែមួយ ឬពីរខ្សែបានទេ។

RNase

មុខងារនិងការប្រើប្រាស់

Ribonuclease អាចជំរុញការរិចរិលនៃអាស៊ីត ribonucleic (RNA) និងអាចត្រូវបានសំយោគដោយសិប្បនិម្មិត។មួនឱសថត្រូវបានប្រើជាប្រធានបទដើម្បីព្យាបាលរបួស និងឈឺសន្លាក់។យោងតាមរបាយការណ៍ ribonuclease អាចផ្លាស់ប្តូរមេតាប៉ូលីសកោសិកា រារាំងការសំយោគមេរោគ រារាំងការរីកសាយនៃមេរោគគ្រុនផ្តាសាយនៅក្នុង vitro និងរារាំងការបង្កើតវ៉ាក់សាំង និងវីរុស Herpes នៅក្នុងអំប្រ៊ីយ៉ុងមាន់។ការប្រើប្រាស់គ្លីនីកនៃ ribonuclease ប្រចាំថ្ងៃ ការចាក់បញ្ចូលតាមសាច់ដុំ 180 mg មានប្រយោជន៍ក្នុងការព្យាបាលជំងឺរលាកស្រោមខួរក្បាលរីករាលដាល ribonuclease អាចជំរុញការរិចរិលនៃអាស៊ីត ribonucleic (RNA) ហើយឥឡូវនេះអាចត្រូវបានសំយោគដោយសិប្បនិម្មិត។មួនឱសថត្រូវបានប្រើជាប្រធានបទដើម្បីព្យាបាលរបួស និងឈឺសន្លាក់។យោងតាមរបាយការណ៍ ribonuclease អាចផ្លាស់ប្តូរមេតាប៉ូលីសកោសិកា រារាំងការសំយោគមេរោគ រារាំងការរីកសាយនៃមេរោគគ្រុនផ្តាសាយនៅក្នុង vitro និងរារាំងការបង្កើតវ៉ាក់សាំង និងវីរុស Herpes នៅក្នុងអំប្រ៊ីយ៉ុងមាន់។ការប្រើប្រាស់គ្លីនីកនៃ ribonuclease ជារៀងរាល់ថ្ងៃ ការចាក់បញ្ចូលតាមសាច់ដុំ 180 mg គឺមានប្រយោជន៍សម្រាប់ការព្យាបាលនៃជំងឺរលាកខួរក្បាលដែលរីករាលដាល។

RNase

និយមន័យអ្នករារាំង

និយមន័យនៃអង្គភាពទប់ស្កាត់ RNase: បរិមាណអង់ស៊ីមដែលត្រូវការដើម្បីរារាំង 50% នៃសកម្មភាពរបស់ 5ng RNase A គឺមួយឯកតា។

របៀបដែល RNase Inhibitors ដំណើរការ

Guanidine isothiocyanate៖

Guanidine isothiocyanate គឺជាសមាសធាតុសរីរាង្គដែលមានរូបមន្តម៉ូលេគុល C2H6N4S ។ប្រើជាចម្បងក្នុងថ្នាំជីវសាស្រ្ត សារធាតុប្រតិកម្មគីមី។ល។ Guanidine isothiocyanate គឺជាភ្នាក់ងារ lysing ប្រូតេអ៊ីន ហើយជារឿយៗវាត្រូវបានគេប្រើជាសមាសធាតុសំខាន់នៃដំណោះស្រាយលីហ្សីសនៅក្នុងថ្នាំប្រតិកម្មម៉ូលេគុល។វាអាចបំបែកជាលិកា បំផ្លាញរចនាសម្ព័ន្ធកោសិកា និងបំបែកអាស៊ីត nucleic ចេញពី nucleoprotein និងមាន denaturation ខ្លាំងទៅ RNase ។វាគឺជាថ្នាំទប់ស្កាត់ RNase ដែលមានប្រសិទ្ធភាពបំផុតនាពេលបច្ចុប្បន្ន។

TRIzol គឺជាសារធាតុចម្រាញ់យក RNA សរុបប្រលោមលោក ដែលអាចទាញយក RNA សរុបដោយផ្ទាល់ពីកោសិកា ឬជាលិកា។វាមានសារធាតុដូចជា phenol និង guanidine isothiocyanate ដែលអាចរំខានកោសិកាយ៉ាងឆាប់រហ័ស និងរារាំង nucleases ដែលបញ្ចេញដោយកោសិកា។

(ទោះជាយ៉ាងនេះក្តី សារធាតុ guanidine isothiocyanate មានគ្រោះថ្នាក់សម្រាប់សុខភាពរបស់អ្នកស្រាវជ្រាវមន្ទីរពិសោធន៍។ )

RNasin៖

អាស៊ីត glycoprotein ដកស្រង់ចេញពីថ្លើមកណ្តុរឬ blastoderm របស់មនុស្ស។Rnasin គឺជាថ្នាំទប់ស្កាត់ RNase ដែលមិនមានការប្រកួតប្រជែង ដែលអាចភ្ជាប់ទៅនឹង RNases ផ្សេងៗ ដើម្បីអសកម្មពួកវា។

(ព័ត៌មានលម្អិត៖ https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hសីតុណ្ហភាពខ្ពស់៖

សីតុណ្ហភាពខ្ពស់ក៏ជាមធ្យោបាយទូទៅនៃការបញ្ចេញជាតិប្រូតេអ៊ីនផងដែរ។

Diethylpyrocarbonate (DEPC)៖

DEPC គឺជាថ្នាំទប់ស្កាត់ RNase ដ៏ខ្លាំងប៉ុន្តែមិនពេញលេញ ដែលអាចរារាំងសកម្មភាព RNase ដោយការរួមផ្សំជាមួយនឹងអាស៊ីតអាមីណូ imidazole ring នៃក្រុមសកម្ម RNase ទៅនឹងប្រូតេអ៊ីន denature ។

ស្មុគស្មាញ Vanadyl ribonucleoside៖

ស្មុគ្រស្មាញដែលបង្កើតឡើងដោយអ៊ីយ៉ុង vanadium oxide និង nucleosides ដែលភ្ជាប់ទៅនឹង RNase ក្នុងទម្រង់ជាសារធាតុផ្លាស់ប្តូរ ដែលអាចរារាំងសកម្មភាពរបស់ RNase ស្ទើរតែទាំងស្រុង។

ផ្សេងទៀត:

SDS, អ៊ុយ, ផែនដី diatomaceous ជាដើម ក៏មានឥទ្ធិពលរារាំងជាក់លាក់លើ RNase ផងដែរ។

ការពិនិត្យអ្នកជំនាញ

លោក Li Yujie ប្រធានបច្ចេកទេស

ប្រធាននាយកដ្ឋានមន្ទីរពិសោធន៍ មន្ទីរពេទ្យ Jiaozhou មន្ទីរពេទ្យ Dongfang ដែលមានទំនាក់ទំនងជាមួយសាកលវិទ្យាល័យ Tongji

ដើម្បីបងា្ករការបំភាយជីវសាស្រ្តនៃ RNase ខាងក្រៅ របាំង ស្រោមដៃ និងមួកគួរតែត្រូវបានពាក់ និងជំនួសជាញឹកញាប់ក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការទាញយក RNA ។គ្រឿងកញ្ចក់ទាំងអស់ត្រូវដុតនំនៅក្នុងឡសម្ងួតនៅសីតុណ្ហភាព 200 អង្សាសេរយៈពេលលើសពី 2 ម៉ោង។សមា្ភារៈដែលប្រើសម្រាប់ដុតនំ ដូចជាផ្លាស្ទិច ត្រូវលាងសម្អាតដោយទឹក DEPC ហើយបន្ទាប់មកលាងដោយទឹកចម្រោះ។សារធាតុ reagents ឬឧបករណ៍ដែលប្រើសម្រាប់ការទាញយក ការអភិរក្ស និងការកំណត់អត្តសញ្ញាណ RNA គួរតែត្រូវបានឧទ្ទិសដល់ RNA ហើយតំបន់ប្រតិបត្តិការ RNA ឯករាជ្យគួរតែត្រូវបានបង្កើតឡើង។

ឯកសារយោង៖

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al ។បាក់តេរី និងមេរោគនៅក្នុងច្រមុះភ្លាមៗមុនពេលចាប់ផ្តើមនៃការឆ្លងមេរោគផ្លូវដង្ហើមផ្នែកខាងក្រោមស្រួចស្រាវចំពោះកុមារជនជាតិដើមអូស្ត្រាលី[J]។Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2018,37 (9): 1785-1794 ។

[2] សាខាគ្រប់គ្រងការឆ្លងមេរោគមន្ទីរពេទ្យនៃសមាគមឱសថបង្ការចិន។គោលការណ៍ណែនាំសម្រាប់ការប្រមូល និងត្រួតពិនិត្យគំរូអតិសុខុមប្រាណគ្លីនិក [J] ។ទិនានុប្បវត្តិនៃការឆ្លងមេរោគមន្ទីរពេទ្យចិន 2018 (20): 3192-3200 ។

[3] "ការធ្វើតេស្តគ្លីនិកដប់ពាន់ហេតុអ្វីបានជាបរិមាណតេស្តជីវវិទ្យាម៉ូលេគុល"