1. រកឃើញការស្រូបយកនៃដំណោះស្រាយ RNA
ការស្រូបយកនៅ 280, 320, 230 និង 260 nm តំណាងឱ្យតម្លៃនៃអាស៊ីត nucleic ផ្ទៃខាងក្រោយ (ភាពច្របូកច្របល់នៃដំណោះស្រាយ) កំហាប់អំបិល និងសារធាតុសរីរាង្គដូចជាប្រូតេអ៊ីន រៀងគ្នា។ជាទូទៅមើលតែ OD260/OD280 (Ratio, R) ប៉ុណ្ណោះ។នៅពេល 1.8 ~ 2.0 យើងគិតថាការចម្លងរោគនៃប្រូតេអ៊ីន ឬសារធាតុសរីរាង្គផ្សេងទៀតនៅក្នុង RNA អាចត្រូវបានអត់ឱន ប៉ុន្តែវាគួរតែត្រូវបានកត់សម្គាល់ថានៅពេលដែល Tris ត្រូវបានប្រើជាសតិបណ្ដោះអាសន្នដើម្បីរកមើលការស្រូបយក តម្លៃ R អាចធំជាង 2 (ជាទូទៅវាគួរតែ <2.2)។នៅពេល R<1.8 ការបំពុលនៃប្រូតេអ៊ីន ឬសារធាតុសរីរាង្គផ្សេងទៀតនៅក្នុងដំណោះស្រាយគឺកាន់តែច្បាស់ ហើយជោគវាសនារបស់ RNA អាចត្រូវបានកំណត់ដោយយោងទៅតាមតម្រូវការ។នៅពេល R> 2.2 វាមានន័យថា RNA ត្រូវបាន hydrolyzed ទៅជាអាស៊ីត nucleic តែមួយ។
2.Electrophoretic លំនាំនៃ RNA
ជាទូទៅ denaturing gel ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ RNA electrophoresis ប៉ុន្តែប្រសិនបើវាគ្រាន់តែសម្រាប់ការរកឃើញគុណភាពនៃ RNA នោះ denaturing gel គឺមិនចាំបាច់ទេ ហើយជែល agarose ធម្មតាអាចប្រើបាន។គោលបំណងនៃ electrophoresis គឺដើម្បីរកមើលភាពសុចរិតនៃ 28S និង 18S bands និងសមាមាត្ររបស់ពួកគេ ឬភាពសុចរិតនៃ mRNA smear ។ជាទូទៅប្រសិនបើក្រុមតន្រ្តី 28S និង 18S មានពន្លឺភ្លឺច្បាស់ និងមុតស្រួច (សំដៅទៅលើគែមនៃក្រុមតន្រ្តីគឺច្បាស់) ហើយពន្លឺនៃ 28S គឺច្រើនជាងពីរដងនៃក្រុមតន្រ្តី 18S យើងចាត់ទុកថាគុណភាពនៃ RNA គឺល្អ។
ខាងលើគឺជាវិធីសាស្រ្តពីរដែលយើងប្រើជាទូទៅ ប៉ុន្តែវិធីសាស្រ្តទាំងពីរនេះមិនអាចប្រាប់យើងយ៉ាងច្បាស់ថាតើមាន RNase សំណល់នៅក្នុងដំណោះស្រាយ RNA ដែរឬទេ។ប្រសិនបើមានបរិមាណ RNase តិចតួចបំផុតនៅក្នុងដំណោះស្រាយ វាពិបាកសម្រាប់យើងក្នុងការរកឃើញវាជាមួយនឹងវិធីសាស្ត្រខាងលើ ប៉ុន្តែភាគច្រើននៃប្រតិកម្មអង់ស៊ីមជាបន្តបន្ទាប់ត្រូវបានអនុវត្តនៅសីតុណ្ហភាពលើសពី 37 ដឺក្រេ និងរយៈពេលយូរ។តាមរបៀបនេះ ប្រសិនបើមានបរិមាណ RNase តិចតួចបំផុតនៅក្នុងដំណោះស្រាយ RNA នោះនឹងមានបរិយាកាស និងពេលវេលាសមស្របបំផុតក្នុងការដើរតួនាទីរបស់ពួកគេក្នុងការពិសោធន៍ជាបន្តបន្ទាប់ ហើយជាការពិតណាស់ការពិសោធន៍នឹងត្រជាក់នៅពេលនេះ។ខាងក្រោមនេះ យើងណែនាំវិធីសាស្រ្តដែលអាចបញ្ជាក់ថាតើមាន RNase សំណល់នៅក្នុងដំណោះស្រាយ RNA
3. ការធ្វើតេស្តរក្សាកំដៅ
យោងទៅតាមការផ្តោតអារម្មណ៍គំរូ សូមគូរ RNA ចំនួន 1000 ng ពីរពីដំណោះស្រាយ RNA ហើយបន្ថែមវាទៅក្នុងបំពង់ centrifuge 0.5 ml ហើយបន្ថែមវាជាមួយនឹង pH 7.0 Tris buffer ដល់បរិមាណសរុប 10 ul ហើយបន្ទាប់មកបិទគម្របបំពង់។ដាក់មួយក្នុងចំនោមពួកគេនៅក្នុងអាងងូតទឹកសីតុណ្ហភាពថេរនៅ 70 អង្សាសេហើយរក្សាវាឱ្យក្តៅរយៈពេល 1 ម៉ោង។ផ្នែកផ្សេងទៀតត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងទូទឹកកក -20 អង្សាសេរយៈពេល 1 ម៉ោង។នៅពេលដល់ម៉ោង យកគំរូទាំងពីរចេញសម្រាប់ electrophoresis ។បន្ទាប់ពី electrophoresis ត្រូវបានបញ្ចប់ សូមប្រៀបធៀបក្រុម electrophoretic នៃទាំងពីរ។ប្រសិនបើក្រុមទាំងពីរមានភាពស៊ីសង្វាក់គ្នា ឬមិនមានភាពខុសគ្នាខ្លាំង (ជាការពិតណាស់ ក្រុមតន្រ្តីរបស់ពួកគេក៏ត្រូវនឹងលក្ខខណ្ឌក្នុងវិធីទី 2) វាមានន័យថាមិនមានការចម្លងរោគ RNase ដែលនៅសល់នៅក្នុងដំណោះស្រាយ RNA ហើយគុណភាពនៃ RNA គឺល្អណាស់។ផ្ទុយទៅវិញ ប្រសិនបើសំណាកដែលដាក់នៅសីតុណ្ហភាព 70°C បង្ហាញពីការរិចរិលជាក់ស្តែង វាបង្ហាញថាមានការចម្លងរោគ RNase នៅក្នុងដំណោះស្រាយ RNA។
2 វិធីសាស្រ្តពិសោធន៍ និងបច្ចេកទេសសម្រាប់ការទាញយក RNA
បញ្ហាដែលយើងជួបប្រទះជាញឹកញាប់នៅពេលទាញយក RNA គឺ: (1) ទិន្នផល RNA មានកម្រិតទាប។(2) RNA មានការបំពុលអំបិលធ្ងន់ធ្ងរ;(3) RNA មានការបំពុលសារធាតុរំលាយសរីរាង្គធ្ងន់ធ្ងរ;(4) ការរិចរិលគំរូ និងបញ្ហាផ្សេងៗទៀត
1. ប្រើជាទូទៅ សារធាតុចម្រាញ់ RNA សរុប
វិធីសាស្ត្រ guanidine isothiocyanate និងវិធីសាស្ត្រ Trizol គឺជាវិធីសាស្ត្រដែលប្រើជាទូទៅបំផុតសម្រាប់ការទាញយក RNA សរុបពីជាលិកាសត្វ និងកោសិកាសត្វ។វាសមស្របជាពិសេសសម្រាប់សំណាកតូចៗ និងជាលិកាដែលពិបាកក្នុងការស្រង់ចេញ ដូចជាការទាញយក RNA សរុបចេញពីស្បែកទន្សាយ និងជាលិកាភ្ជាប់សត្វ។លើសពីនេះ Trizol ដែលជាសារធាតុ lysis គោលបំណងទូទៅ ក៏អាចត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការទាញយកជាលិការុក្ខជាតិ បាក់តេរី ផ្សិត និងជាលិកាផ្សេងៗទៀត។សម្រាប់ជាលិការុក្ខជាតិដែលមានសារធាតុ polysaccharides និង polyphenols ដូចជា camellia oleifera ស្លឹកតែ rapeseed ជាដើម វិធីសាស្ត្រ CTAB ក៏អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីទាញយក RNA សរុបផងដែរ។
ជាវិធីសាស្រ្តសាមញ្ញ វិធីសាស្ត្រពីរជួរក៏មានប្រជាប្រិយភាពខ្លាំងផងដែរ ដោយសារប្រតិបត្តិការសីតុណ្ហភាពធម្មតារបស់វា មិនចាំបាច់បន្ថែម RNase និងសុវត្ថិភាពទេ ដោយគ្មានក្លរ៉ូហ្វម ហ្វេណុល និងសារធាតុសរីរាង្គផ្សេងទៀតសម្រាប់ការស្រង់ចេញ។(ផលិតផលដែលបានណែនាំ )
2. ការទាញយក RNA សរុបពីជាលិកាសត្វ
(1) ព្យាយាមជ្រើសរើសជាលិកាស្រស់ ប្រសិនបើវាមិនស្រស់ (និយមក្នុងរយៈពេលបីខែ - ទូទឹកកក 80 ℃ ឬកកក្នុងអាសូតរាវ។ ពេលកាត់ជាលិកាមិនត្រូវកាត់ដោយផ្ទាល់នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ ត្រូវប្រាកដថាត្រូវដាក់វានៅលើប្រអប់ទឹកកក ព្យាយាមជៀសវាងការកកម្តងហើយម្តងទៀត។
(2) ប្រើកន្ត្រៃស្អាត និងកន្ត្រៃកាត់ជាលិកាតូចមួយ ព្យាយាមកាត់ផ្នែកកណ្តាលនៃជាលិកានៅពេលកាត់សំណាក ឬដំបូងកាត់ជាលិកាធំពីកណ្តាល រួចកាត់សំណាកនៅទីតាំងស្នាមវះស្រស់។ជាលិកាដែលបានយកចេញគួរត្រូវបានរុះរើទាំងស្រុង ដាក់ជាលិការរុះចូលទៅក្នុងបំពង់ EP ដោយគ្មាន RNase បន្ថែម lysate ជាលិការរុះគួរត្រូវបានប៉ះពាល់យ៉ាងពេញលេញទៅនឹង lysate និងរៀបចំសម្រាប់ការធ្វើដូចគ្នា។
(3) សម្រាប់ជាលិកាធម្មតា សូមជ្រើសរើសជាលិកាដែលមានទំហំសណ្តែក (30-60 mg) សម្រាប់ភាពដូចគ្នាប្រសិនបើជាលិកាមានបរិមាណច្រើននៃប្រូតេអ៊ីន ខ្លាញ់ ឬជាលិកាសរសៃក្រាស់ដូចជាថ្លើម បង្កើន ឬបន្ថយបរិមាណជាលិកាកាត់ឱ្យបានសមរម្យ (ជាជម្រើសជ្រើសរើស 10~20 mg)។
(4) ប្រសិនបើសាច់ដុំត្រី សាច់បង្គា ចាហួយ និងជាលិកាផ្សេងទៀតដែលមានបរិមាណទឹកខ្ពស់ត្រូវបានស្រង់ចេញ បរិមាណគំរូគួរតែត្រូវបានកើនឡើងយ៉ាងសមស្រប (ត្រូវបានណែនាំ 100-200 មីលីក្រាម)។
(5) ប្រសិនបើលក្ខខណ្ឌអនុញ្ញាត ជាលិកាសត្វអាចត្រូវបានស្រង់ចេញដោយផ្ទាល់ បន្ទាប់ពីត្រូវបានធ្វើឱ្យដូចគ្នាជាមួយនឹងឧបករណ៍ homogenizer ជាលិកាដែលមានកម្រិតខ្ពស់ ប្រសិនបើមិនមានឧបករណ៍បែបនេះ។
(6) RNA ដែលទទួលបានបន្ទាប់ពីការស្រង់ចេញចុងក្រោយត្រូវតែដាក់នៅលើប្រអប់ទឹកកកភ្លាមៗដើម្បីកាត់បន្ថយការរិចរិលនៃ RNA ។
3. ការទាញយកកោសិកាសត្វ RNA
(1) កោសិកាព្យួរ: centrifuge ដោយផ្ទាល់ហើយបោះចោលឧបករណ៍ផ្ទុក, លាងជាមួយ PBS មាប់មគរយៈពេល 1-2 ដងបន្ទាប់មកផ្អាកជាមួយនឹងបរិមាណសមរម្យនៃ PBS ហើយបន្ទាប់មកបន្ថែម lysate សម្រាប់ lysis ។កុំបន្ថែម lysate ដោយផ្ទាល់ទៅកោសិកា precipitated បន្ទាប់ពីការបោះចោលរាវទាំងស្រុង។វានឹងបណ្តាលឱ្យកញ្ចប់អ៊ីស្តូនដែលបានបញ្ចេញបន្ទាប់ពីកោសិកាលីស៊ីតនៅលើស្រទាប់ខាងក្រៅដើម្បីប្រកាន់ខ្ជាប់នូវកោសិកាខាងក្រៅដែលជ្រាបទឹកដោយហេតុនេះកំណត់ទំនាក់ទំនងនៃកោសិកាខាងក្នុងគ្រាប់ជាមួយ lysate ។ដែលជាលទ្ធផលនៅក្នុងកោសិកា lysis មិនពេញលេញ និងកាត់បន្ថយទិន្នផល RNA ។
(2) កោសិកាដែលជាប់ពាក់កណ្ដាល ឬមិនជាប់ស្អិត៖ បន្ទាប់ពីបោះចោលឧបករណ៍ផ្ទុករួច លាងសម្អាតជាមួយ PBS 1-2 ដង បន្ទាប់មកស្រូបបរិមាណ PBS ដោយផ្ទាល់ ហើយផ្លុំចានវប្បធម៌ដោយប្រើបំពង់ ឬកាំភ្លើងដើម្បីផ្លុំកោសិកា ហើយផ្ទេរពួកវាទៅកោសិកាដែលគ្មាន RNA ។បន្ថែម lysate ទៅបំពង់ EP នៃអង់ស៊ីមសម្រាប់ការទាញយក។
(3) កោសិកាដែលនៅជាប់គ្នា៖ ចាំបាច់ត្រូវរំលាយជាមួយ trypsin ជាមុនសិន បន្ទាប់មកប្រមូលចូលទៅក្នុងបំពង់ EP ដែលគ្មាន RNase ផ្ចិតដើម្បីយក supernatant ចេញ លាង 1-2 ដងជាមួយ PBS ដើម្បីយក trypsin លើសចេញ ហើយផ្អាកម្តងទៀតជាមួយនឹងបរិមាណសមស្របនៃ PBS បន្ទាប់មកបន្តទៅជំហានស្រង់ចេញ។
4. ការទាញយក RNA របស់រុក្ខជាតិ
ជាលិការុក្ខជាតិសម្បូរទៅដោយសមាសធាតុ phenolic ឬសម្បូរទៅដោយសារធាតុ polysaccharides ឬផ្ទុកសារធាតុរំលាយអាហារបន្ទាប់បន្សំដែលមិនស្គាល់អត្តសញ្ញាណ ឬមានសកម្មភាពខ្ពស់នៃ RNase ។សារធាតុទាំងនេះត្រូវបានរួមបញ្ចូលគ្នាយ៉ាងតឹងរ៉ឹងជាមួយនឹង RNA បន្ទាប់ពីកោសិកា lysis ដើម្បីបង្កើតជាស្មុគស្មាញដែលមិនអាចរលាយបាន ឬទឹកភ្លៀង colloidal ដែលពិបាកដកចេញ។ដូច្នេះហើយនៅពេលដែលយើងស្រង់ចេញជាលិការុក្ខជាតិ យើងត្រូវជ្រើសរើសឈុតសម្រាប់រុក្ខជាតិ។lysate នៅក្នុងកញ្ចប់អាចដោះស្រាយបញ្ហានៃការកត់សុីងាយស្រួលនៃសារធាតុ polyphenols និងការបំបែកសមាសធាតុ polysaccharide និងអាស៊ីត nucleic ។
(សម្រាប់ការចម្រាញ់ពីរុក្ខជាតិ polysaccharide polyphenol RNA ផលិតផលដែលបានណែនាំ៖
(១) សំបក សំបក គ្រាប់ ស្លឹក ជាដើម ត្រូវកិនឲ្យពេញក្នុងបាយអ។ក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការកិន អាសូតរាវគួរតែត្រូវបានបំពេញឱ្យទាន់ពេលវេលា ដើម្បីជៀសវាងការរលាយនៃគំរូ។សំណាកដីគួរតែត្រូវបានបន្ថែមយ៉ាងលឿនទៅ lysate និងរង្គោះរង្គើដើម្បីជៀសវាងការរិចរិល RNA ។
(2) សម្រាប់សំណាកដែលសម្បូរជាតិសរសៃ ដូចជាអង្ករ និងស្លឹកស្រូវសាលី បរិមាណនៃការស្រង់ចេញគួរតែត្រូវបានកាត់បន្ថយឱ្យសមស្រប បើមិនដូច្នេះទេ ការកិនជាលិកា និងលីសនឹងមិនពេញលេញ ដែលនាំឱ្យទិន្នផល RNA ចម្រាញ់ទាប។
(3) សម្រាប់ជាលិការុក្ខជាតិដែលមានជាតិទឹកខ្ពស់ ដូចជាផ្លែទទឹម ផ្លែឪឡឹក ផ្លែ peach ជាដើម ទំហំគំរូគួរត្រូវបានបង្កើនឱ្យសមស្រប (100-200 mg ជាជម្រើស)។
(4) ជាលិការុក្ខជាតិដូចជា ស្លឹករុក្ខជាតិ មើម ផ្លែឈើរឹង និងវត្ថុធាតុផ្សេងទៀត ជាទូទៅត្រូវបានណែនាំអោយប្រើអាសូតរាវដើម្បីកិនគ្រឿងផ្សំក្នុងបាយអ ហើយបន្ទាប់មកបន្តទៅជំហានស្រង់ចេញ។ឧបករណ៍លាយជាលិកាធម្មតាប្រហែលជាមិនមានប្រសិទ្ធភាពក្នុងការធ្វើឱ្យជាលិការុក្ខជាតិដូចគ្នាទេ ហើយជាទូទៅមិនត្រូវបានណែនាំទេ។
5. ការប្រុងប្រយ័ត្នសម្រាប់ការទាញយក RNA
(1) សំណាកជាលិកាគួរតែស្រស់តាមដែលអាចធ្វើបាន ដើម្បីជៀសវាងការកកម្តងហើយម្តងទៀត។
(2) ជាលិកាគួរតែត្រូវបានដីពេញកំឡុងពេលស្រង់ចេញ ហើយបរិមាណនៃជាលិកាមិនគួរតិចពេកទេ ទុកអោយច្រើនពេក។
(3) ពេលវេលាភ្ញាស់គ្រប់គ្រាន់គួរតែត្រូវបានផ្តល់ឱ្យបន្ទាប់ពីបន្ថែម lysate ដើម្បី lyse ពេញលេញនៃគំរូ។
(4) នៅពេលប្រើវិធីសាស្ត្រ Trizol សម្រាប់ការស្រង់ចេញ គោលការណ៍នៃការស្រូបយក supernatant បន្ទាប់ពីការ stratification គឺ "ចូលចិត្តស្រូបចូលតិចជាងដកដង្ហើមចូលច្រើន" ហើយមិនត្រូវស្រង់ទៅស្រទាប់កណ្តាលទេ បើមិនដូច្នេះទេវានឹងបណ្តាលឱ្យមានការចម្លងរោគ DNA ធ្ងន់ធ្ងរ។
(5) នៅពេលបោកគក់ វត្ថុរាវបោកគក់គួរតែជ្រាបចូលយ៉ាងពេញលេញជុំវិញជញ្ជាំងបំពង់ ដើម្បីធានាថាការបោកគក់បានហ្មត់ចត់។
(6) សម្រាប់វិធីដកជួរឈរ បន្ថែមពីលើការផ្ដាច់ជួរឈរបន្ទាប់ពីបោកគក់ ជួរឈរ adsorption ក៏ត្រូវដាក់ក្នុងកៅអីដែលស្អាតខ្លាំង ហើយផ្លុំរយៈពេល 5-10 នាទី ដើម្បីហួតសារធាតុរំលាយសរីរាង្គឱ្យស្ងួតទាំងស្រុង។
(7) នៅដំណាក់កាលចុងក្រោយនៃវិធីសាស្ត្រជួរឈរ បន្ទាប់ពីបន្ថែមទឹក DEPC វាគួរតែត្រូវបាន incubed 3-5 នាទីឬទឹក DEPC គួរតែត្រូវបានកំដៅដល់ 60 ° C ជាមុនដើម្បីបង្កើនទិន្នផល elution ។នៅក្នុងវិធីប្រពៃណី Trizol cleavage និង isopropanol precipitation method RNA ចុងក្រោយត្រូវបានរំលាយនៅក្នុងទឹក DEPC ដូច្នេះគួរតែផ្តល់ពេលវេលាសមស្របសម្រាប់ការរំលាយ ហើយផ្នែកខាងក្រោមនៃបំពង់ centrifuge គួរតែត្រូវបានផ្លុំជាបន្តបន្ទាប់ជាមួយនឹងចុង pipette ។
3 ធីhree មូលហេតុ និងដំណោះស្រាយសម្រាប់ការប្រមូលផ្តុំ RNA ទាប/គុណភាពអន់
1. ទិន្នផលទាបពេក
សំណាកដែលស្រង់ចេញមានកម្រិតទាបពេក បរិមាណសរុបមិនគ្រប់គ្រាន់ ឬសំណាកដែលស្រង់ចេញគឺច្រើនពេក ហើយលីសមិនពេញលេញ។ជាលិកាឬកោសិកាដែលមានគុណភាពសមស្របគួរតែត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការស្រង់ចេញ ការព្យាបាលមុននៃសំណាកត្រូវតែធ្វើបានល្អ ហើយលីសគួរតែគ្រប់គ្រាន់។
2. សំណល់ហ្សែន
នៅពេលស្រង់ចេញដោយវិធីសាស្ត្រ Trizol នៅពេលដែល supernatant ត្រូវបានជញ្ជក់ចូលទៅក្នុងស្រទាប់កណ្តាលបន្ទាប់ពីការបញ្ឈប់ ការចម្លងរោគហ្សែនធ្ងន់ធ្ងរនឹងត្រូវបានបង្កឡើង។ការប្រុងប្រយ័ត្នបន្ថែមគួរតែត្រូវបានគេយកនៅពេលដែលស្រទាប់ដើម្បីជៀសវាងការជញ្ជក់ចូលទៅក្នុងស្រទាប់កណ្តាល។ប្រសិនបើវិធីសាស្ត្រជួរឈរត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការស្រង់ចេញ ឧបករណ៍ដែលមាន DNase I អាចត្រូវបានជ្រើសរើសសម្រាប់ការស្រង់ចេញ។អាស៊ីត nucleic adsorbed នៅលើភ្នាសត្រូវបានរំលាយដោយផ្ទាល់ជាមួយ DNase I ដែលអាចកាត់បន្ថយសំណល់ DNA បានយ៉ាងច្រើន។
3. ការរិចរិល RNA
វាអាចជាការរិចរិលនៃសំណាកដែលបានស្រង់ចេញដោយខ្លួនវា ឬការរិចរិលដែលបង្កឡើងក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការស្រង់ចេញ។តាមដែលអាចធ្វើបាន សំណាកស្រស់គួរតែត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការទាញយក RNA ហើយសំណាកដែលប្រមូលបានគួររក្សាទុកក្នុងអាសូតរាវ ឬ -80°C ទូទឹកកកទាន់ពេលវេលា ហើយការបង្កក និងការរលាយម្តងហើយម្តងទៀតគួរតែត្រូវបានជៀសវាង។គន្លឹះឥតគិតថ្លៃ RNase/DNase បំពង់ centrifuge និងសម្ភារៈផ្សេងទៀតគួរតែត្រូវបានប្រើនៅក្នុងដំណើរការទាញយក RNA ។ដំណើរការស្រង់ចេញគួរតែលឿនតាមដែលអាចធ្វើទៅបាន។RNA ដែលស្រង់ចេញគួរតែត្រូវបានដាក់នៅលើប្រអប់ទឹកកក ហើយរក្សាទុកនៅ -80 ទាន់ពេល។ប្រសិនបើ RNA ស្រង់ចេញត្រូវរកឃើញដោយ gel electrophoresis នោះ electrophoresis គួរតែត្រូវបានអនុវត្តភ្លាមៗបន្ទាប់ពីការស្រង់ចេញ ហើយសតិបណ្ដោះអាសន្ន electrophoresis គួរតែត្រូវបានជំនួសដោយឧបករណ៍ដែលបានរៀបចំថ្មី។
4. អំបិល និងសំណល់សារធាតុរំលាយសរីរាង្គ
សារធាតុចម្រាញ់មានផ្ទុកនូវអំបិល phenol និង guanidine ហើយដំណោះស្រាយលាងសម្អាតមានផ្ទុកអេតាណុល។ក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការស្រង់ចេញ lysate មិនត្រូវបានស្រូប និងបោះចោលទាំងស្រុងទេ ហើយដំណោះស្រាយលាងសម្អាតមិនស្ងួតទាំងស្រុងទេ។អំបិលដែលនៅសេសសល់ និងសារធាតុរំលាយសរីរាង្គគឺមានគ្រោះថ្នាក់ដល់ការចម្លងបញ្ច្រាសជាបន្តបន្ទាប់ និង PCR ។កម្រិតផ្សេងគ្នានៃការទប់ស្កាត់ ដូច្នេះ lysate ជាលិកាគួរតែត្រូវបានយកចេញទាំងស្រុងក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការស្រង់ចេញ ហើយការលាងគួរតែគ្រប់គ្រាន់ដើម្បីឱ្យជញ្ជាំងជុំវិញបំពង់អាចលាងសម្អាតបាន។លើសពីនេះទៀតបំពង់ត្រូវបានទទេហើយផ្លុំគឺជាជំហានចាំបាច់ដែលនឹងកាត់បន្ថយសំណល់នៃសារធាតុសរីរាង្គបន្ថែមទៀត។
សម្រាប់ព័ត៌មានបន្ថែមអំពីការទាញយក RNA សូមតាមដានគេហទំព័ររបស់យើង៖
www.foreivd.com សម្រាប់ព័ត៌មានបន្ថែម។
ពេលវេលាផ្សាយ៖ ០១-០២-២០២២
